在選定的工作條件下，采用高效液相色譜柱分離，紫外吸收檢測器檢測，外標法定量，計算樣品中富馬酸和馬來酸的含量。
1.試劑和材料
富馬酸：質量分數≥99.0％。
馬來酸：質量分數為99.0%。
氫氧化鈉溶液：20g/L。
磷酸鹽溶液：將磷酸鹽（優良等級純度）（1?0.02）mL加入到1000mL容量瓶中，100mL甲醇（HPLC級，可根據柱效應進行調整），用水稀釋至刻度，然后用0.45μm濾膜過濾。
2.儀器和設備
高效液相色譜儀系統（HPLC）
高壓泵：無脈沖，可保持0.1毫升/分鐘至10.0毫升/分鐘的流量。
定量環：5μL。
紫外光檢測器：可變波長。
數據處理系統：色譜工作站或數據處理器。
抽濾系統
過濾系統采用纖維素酯膜濾紙（用于流動相預處理)孔徑0.45um。
過濾系統
過濾系統使用孔徑為0.45μm的纖維素酯膜濾紙(用于樣品預處理)
進樣器
自動或微量注射器，50或100毫升。
3.色譜分析條件
推薦的色譜柱和典型色譜條件富馬酸和馬來酸測定典型高效液相色譜儀各組分的相對保留時間其他色譜柱和操作條件可以達到相同的分離度。
4.分析步驟
標準樣品溶液的制備
富馬酸標準樣品溶液的制備
富馬酸鹽50 mg，準確至0.0002克，溶于適量水(如有必要，加入少量氫氧化鈉溶液)，轉至50 mL容量瓶中，用磷酸溶液稀釋成垢。取下上述溶液（1+0.02）ml，并將其放入容量為50 ml的瓶中。用磷酸將溶液稀釋到刻度。好好搖一搖。用0.45um濾膜填充，然后用超聲波除氣。
馬來酸標準樣品溶液的制備
馬來酸50 mg，準確至0.0002g，溶于適量水(必要時加入少量氫氧化鈉溶液)，轉至250 ml容量瓶，用磷酸鹽稀釋成規模化。取下上述溶液（1+0.02）ml，放入100 ml容量瓶中。用磷酸將溶液稀釋到刻度。好好搖一搖。用0.45um濾膜填充，然后用超聲波除氣。
樣品溶液的制備
0.2 g實驗室樣品，準確至0.0 0 2 g，置于50 ml容量瓶中，流動相稀釋，搖勻，用0.4 5μm濾膜過濾，再用超聲波脫附。測定
根據高效液相色譜操作規程，調整溫度和流速，使其符合分析條件，基線穩定后，注入標準樣品溶液用微量注射器取標準樣品溶液5μL和注射液(或自動進樣)記錄富馬酸或馬來酸的峰面積A2。
用5毫升的微型取樣器對樣品溶液進行取樣，并記錄待測物質的峰面積a
5.結果計算
對富馬酸或馬來酸的質量分數2用%表示按公式計算：
式中：
A1樣品液中待測物質的峰面積；
標準樣品溶液中富馬酸或馬來酸的2峰面積；
M2標準樣品溶液中富馬酸或馬來酸的注射量g；
m樣品體積（單位：微克）