在經典色譜的基礎上，高效液相色譜(HPLC)是以氣相色譜法為基礎的。技術上，將流動相轉變為高壓輸送輸送壓力可達4.9Pa色譜柱用小粒徑填料以特殊的方式填充，使柱效應比經典液相色譜（數萬或數千米塔板）要高得多。同時，在色譜柱后面有一個高靈敏度的檢測器，可以連續檢測流出液。
特點
1.高壓：液相色譜以液體為流動相（稱為載液），液體在色譜柱中流動阻力大。為了快速通過色譜柱，必須對載液施加高壓。一般可達150-350-105帕。
2.高速：柱內流動相的流速遠快于經典色譜法，一般可達1-10ml/min。高效液相色譜所需的分析時間遠小于經典液相色譜，通常小于1小時。
3.高效：近年來發展了許多新的固定相，大大提高了分離效率。
4.高靈敏度：高靈敏度檢測器在高效液相色譜(HPLC)中得到了廣泛的應用，進一步提高了分析的靈敏度。例如，熒光探測器的靈敏度可達10-11g。此外，樣本大小很小，通常是幾微升。
5.應用范圍廣：氣相色譜法與高效液相色譜法的比較：氣相色譜法雖然具有分離能力好、靈敏度高、分析速度快、操作方便等優點，由于工藝條件的限制，氣相色譜法難以分析沸點高或熱穩定性差的物質。高效液相色譜法(HPLC)只要求樣品不需氣化即可制成溶液，不受樣品揮發性的限制。原則上，高效液相色譜法可用于高沸點、熱穩定性差、相對分子質量高（大于400）的有機物的分離和分析（這些物質約占總有機物的75%-80%）。據統計，約20%的已知化合物可以用氣相色譜法進行分析，約70%-80%的化合物可以用液相色譜法進行分析。
高效液相色譜（hplc）可分為高效凝膠色譜、疏水高效液相色譜、高效液相色譜、高效離子交換液相色譜、高效液相色譜和高效液相色譜不同類型的高效液相色譜分離或分析的原理基本上類似于相應的普通液相色譜的原理。不同之處在于高效液相色譜法靈敏、快速、分辨率高、重復性好，必須在色譜儀中進行。