MTT、CCK-8試劑盒是進行細胞增殖和細胞毒性檢測的常用試劑盒,在進行實驗時應該如何從兩種試劑盒中進行選擇呢?
一、原理介紹:
MTT試劑盒中含有MTT(化學名:3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽),外源性MTT能夠被活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶還原為深紫色結晶甲瓚,該產物不溶于水,會沉積在細胞中,而死細胞無此功能。加入特定溶劑后,甲瓚可以被完全溶解,然后通過酶標儀測定490 nm波長附近的吸光度。細胞增殖越多越快,對應的吸光度越高;細胞毒性越大,對應的吸光度越低。
CCK-8(Cell Counting Kit-8)試劑盒廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性檢測。本試劑中含有WST-8(化學名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽),是一種類似于MTT的化合物,它在電子耦合試劑1-Methoxy PMS存在條件下,可被線粒體內的脫氫酶還原為橙色甲瓚產物Formazan,該產物具有高度水溶性,生成的Formazan數量與活細胞數量成正比。檢測速度快且靈敏度高于任何其它四唑鹽,如MTT、XTT或MTS。細胞增殖越多越快,則顏色越深;細胞毒性越大,則顏色越淺。
二、優勢介紹:
MTT配制過程需避光、無菌,且MTT比較難溶,需振蕩器混勻,配置過程麻煩。MTT試劑盒中是已配制好的組分,實驗過程中直接添加即可。與CCK8試劑盒相比,性價比更高。
序號 | 組分 | 500T CT0002 |
1 | MTT溶液 | 5 mL |
2 | Formazan溶解液 | 60 mL |
CCK-8試劑盒,不需配制,無需換液,步驟便捷,靈敏度高。同MTT相比對細胞無明顯毒性,一般狀況下對細胞形態沒有明顯的改變,因此加入CCK-8溶液顯色后,可選擇不同時間點反復用酶標儀讀板,找到實驗最佳測定時間。
序號 | 組分 | 100T CT0001-A | 500T CT0001-B |
1 | CCK-8溶液 | 1 mL | 5 mL |
三、注意事項:
1、試劑使用前,注意檢查是否已完全解凍,必須在完全溶解并混勻后使用。
2、使用96孔板進行檢測,如果細胞培養時間較長,一定要注意液體蒸發。96孔板外圍一圈最容易蒸發,可以棄用外圍一圈,改加PBS、水或培養液。也可以把96孔板置于靠近培養箱內水源的地方,以減緩蒸發。
3、最終進行細胞存活率等計算時,需要扣除本底的吸光度,因此要注意進行空白孔的設置。
4、操作時注意不要產生氣泡,在最終讀板時注意檢查孔內是否有氣泡。氣泡會影響測定結果,可通過輕敲混勻的方式進行消除。
那么,到底應該如何進行選擇呢?敲黑板,劃重點:
1、如果對細胞增殖或細胞毒性的檢測要求不高,建議選擇性價比更高的MTT試劑盒;
2、如果要求較高的檢測靈敏度,建議選擇靈敏度高的CCK-8試劑盒;
3、進行大批量樣品檢測時,建議選擇CCK-8試劑盒,因為CCK-8試劑盒操作更便捷;
4、如果細胞毒性要求比較嚴格,建議選擇CCK-8試劑盒,因為CCK-8試劑盒對細胞無明顯毒性,一般情況下對細胞形態沒有明顯的改變;