隨著中藥研究事業的不斷發展，中藥材在國內和國際的需求量越來越大，藥物的重要有效成分的含量成為質量檢查必不可少的參數，高效液相色譜的使用越來越廣泛。針對高效液相色譜對藥物尤其是中藥材的檢測，本文采用HPLC法測定了銀杏葉中黃酮物質的含量。
2010年版《中國藥典》共收載品種4600余種，新增1300余種。其中收載中藥材、中藥飲片、中成藥和中藥提取物標準增幅最大，新版藥典共收載了2136個中藥品種，比原來增加了900多種。同時新版藥典強調用更先進的方式對中藥進行含量測定、雜質鑒別、藥物代謝動力學研究，實現與國際接軌。
高效液相色譜法以高速、高效、高靈敏度、高分離度的特點在藥物的含量測定、組分分析、質量控制等各個方面廣泛應用。在西藥的分析中應用于質量控制，尤其表現在微量成分和痕量成分的分析。在中藥材鑒定和質量分析上的應用也越來越重要，它的應用將促進我國中藥質量的標準化和規范化。隨著中藥研究事業的不斷發展，中藥材在國內和國際的需求量越來越大，藥物的重要有效成分的含量成為質量檢查必不可少的參數，高效液相色譜的使用越來越廣泛。
針對高效液相色譜對藥物尤其是中藥材的檢測，本文采用HPLC法測定了銀杏葉中的黃酮物質的含量。
圖1. 槲皮素標準品色譜圖。
銀杏葉為銀杏科植物銀杏的（Ginkgo Biloba）葉子，經現代藥理和臨床研究表明銀杏葉提取物可以軟化血管，增加冠狀動脈血流量，對心絞痛、腦血管疾病具有顯著療效，并且廣泛應用于臨床，我們采用超臨界萃取技術萃取銀杏葉中的黃酮類成分，通過水解后，用Labtech LC 600 高效液相色譜儀測定其黃酮苷之一槲皮素的含量，雜質干擾少，定量準確，回收率、重復性高。
實驗部分
儀器與試劑
儀器：Labtech LC600 高效液相色譜儀；超臨界流體萃取裝置；Angel kromasil C18 （5um，250×4.6mm）；試劑：甲醇（AR. 北京化學試劑公司），磷酸（AR. 北京化學試劑公司），甲醇（色譜級J.T. Baker）；標準品：槲皮素對照品（Sigama），銀杏葉提取物（GBE）（北京中碩醫藥開發有限公司）。
圖2. 不同濃度槲皮素標準品標準曲線。
實驗操作及條件
1.槲皮素標準曲線
1.1稱取槲皮素標準品61.5mg，用甲醇溶解，在容量瓶中定容至100ml，作為槲皮素母液，備用。
1.2分別取母液0.2ml、0.5ml、1.0ml、3.0ml、6.0ml于50ml容量瓶中，用流動相定容，作為標準溶液，其濃度分別為：0.00246mg/ml、0.00615mg/ml、0.0123mg/ml、0.0369mg/ml、0.0738mg/ml。
1.3.HPLC法檢測槲皮素標準溶液制備標準曲線。
實驗條件：檢測波長，360nm；流動相，甲醇:0.4%磷酸 = 50:50；流速，1ml/min；進樣量，20μl；柱溫，室溫。
圖3.銀杏葉提取物中槲皮素含量色譜圖。
2.銀杏葉提取物的超臨界流體萃取
2.1 裝樣：精確稱取GBE 5.0mg，直接裝入漏斗型聚四氟管內。
2.2 靜態萃取：待萃取管溫度和限流器溫度穩定在60℃時，改性劑泵向系統中打入改性劑10ml，然后系統打壓至5000psi，開始靜態萃取，靜態萃取時間40min。
2.3 動態萃取：靜態萃取結束后，同時啟動改性劑泵和二氧化碳泵，其流量分別為0.4ml/min和1.2ml/min；并調節限流器使得系統壓力維持在5000psi+/-150psi，動態萃取40min。
2.4 收集：采用50ml收集管，加入20ml甲醇作為收集液進行收集。
2.5 水解：在接收液中按4:1的比例加入25%鹽酸，在電熱消解儀上85℃下，水解40min，迅速用冷水將樣品冷卻，用流動相定容到50ml作為帶測試樣品。
2.6 樣品的HPLC測試：取上述水解定容后的樣品按照1.3條件進行HPLC分析。
圖4.銀杏葉提取物中槲皮素（加標）色譜圖。
實驗結果
槲皮素標準曲線
分別取實驗1.2配制的5個濃度水平的槲皮素標準溶液，用HPLC進行檢測。槲皮素標準品色譜圖如圖1所示。
計算0.00246mg/ml、0.00615mg/ml、0.0123mg/ml、0.0369mg/ml、0.0738mg/ml 5個濃度標準品的峰面積，繪制標準曲線，其回歸曲線及線性方程如圖2所示。
銀杏葉提取物中槲皮素的含量測定
對樣品進行連續3次測定，其測定結果如表2所示。
經計算：GBE中槲皮素的平均含量為：0.01395mg/g，RSD為1.62%。
銀杏葉提取物中槲皮素回收率實驗
在漏斗型聚四氟萃取管中加入銀杏葉提取物 5.0mg，槲皮素對照品約2.04.0mg，按實驗前面所述樣品萃取測試方法操作，計算加入槲皮素對照品的回收率。在相同條件下連續5次測定槲皮素加標回收率，計算其RSD。
經計算：五次萃取的槲皮素回收率均在85%以上，平均回收率為93.64%，RSD為5.37%。
結果與討論
使用 LabTech LC 600 高效液相色譜儀可以快速簡單地測定銀杏葉提取物中的槲皮素，由譜圖可知，銀杏葉提取物中其他黃酮類物質對槲皮素的測定沒有干擾，可以精確測定銀杏葉提取物中槲皮素含量。通過加樣回收實驗，測定其回收率為85%以上，定量結果準確。此法為銀杏葉提取物中黃酮類物質的測定提供了一個快速簡單的方法，為廣大藥廠、醫院、科研單位提供了優良的解決方案。