血漿中治療性多肽的定量分析

圖1. 采用MRM模式對大鼠血漿提取物中的去氨加壓素進行UPLC/MS/MS定量分析。上面的色譜圖表示采用Xevo TQ-S的新型StepWave離子傳輸技術的峰值響應；下面的色譜圖表示采用傳統離子傳輸技術時的峰值響應。
 

多肽因其高耐受性、靶受體選擇性和高效能的特性而逐漸被作為治療藥物使用。要對生物體液中的這些治療性多肽進行準確定量，就必須具備選擇性分離技術、高分辨力色譜系統及高靈敏度檢測器。高分辨力的色譜系統可從血漿和血液中的內源性多肽中分離出目標分析物，其中部分可能是相同質量數的離子或形成相同質量數的碎片離子。由于這些治療性多肽可模仿或取代內源性多肽的活性，檢測過程中必須對這些內源性和外源性多肽進行區分。

盡管我們觀測到的是多電荷化合物，且多肽高分子質量為1000~4000 amu，但對于這些多肽的檢測，要求質譜儀的質量檢測上限為2000 m/z才可成功對其進行分析。

本文針對高靈敏度多肽生物分析，介紹了ACQUITY UPLC系統和新型的高靈敏度串聯四極桿質譜系統Xevo TQ-S的使用情況。

實驗條件

色譜條件

LC系統：ACQUITY UPLC（二元溶劑管理系統、樣品管理器、HT色譜柱恒溫箱）；柱條件：ACQUITY UPLC BEH C18柱，1.7um，2.1×50um；柱溫：40℃；梯度：乙腈（含0.1%甲酸），從5%~45%洗脫1.5min以上；流速：450 ul/min；進樣量：10ul。

質譜條件

質譜系統：Xevo TQ-S和Xevo TQ于電噴霧正離子模式下操作，MRM數據采集535 => 328；電壓：對質譜儀的錐孔氣流及毛細管電壓、錐孔電壓和碰撞電壓都進行了優化；源溫度： 140℃；脫溶劑溫度：625℃；噴霧氣體流量：1200 L/h。

圖2. 采用MRM模式對大鼠血漿提取物中的去氨加壓素進行UPLC/MS/MS定量分析。上面的色譜圖表示采用Xevo TQ-S的新型StepWave離子傳輸技術的峰值響應；下面的色譜圖表示采用傳統離子傳輸技術時的峰值響應（將基線擴展以顯示0.74min時的去氨加壓素色譜峰）。

數據管理

MassLynx 4.1，TargetLynx應用管理系統。

結果和討論

多肽治療藥物具有極好的療效，但同時也通過新陳代謝或以原型藥物迅速排出體外。為準確測定這些藥物的藥代動力學參數（PK），需要通過高靈敏度的LC/MS/MS系統來確定后期時間點，從而確定PK曲線的消除相。Xevo TQ-S是一種具備創新源設計的新型串聯四極桿質譜儀。這種新的設計允許更多的分析物離子遷移至分析器，從而大大提高了離子抽樣過程的效率。它是通過使用更大的抽樣孔和差分抽氣區以及離軸多層環離子傳輸技術，以阻止中性化合物進入儀器的分析區。

為評估在生物體液中進行多肽分析時的靈敏度增加情況，將去氨加壓素注入血漿并通過乙腈沉淀蛋白質（2:1）萃取。采用傳統光學技術和新的StepWave光學技術所獲取的數據如圖1所示。可以看到：在采用傳統離子傳輸技術的儀器中幾乎看不到去氨加壓素的色譜峰，而在Xevo TQ-S質譜儀中則可看到明顯的色譜峰。將傳統源的基線擴展，比較圖2中的數據，可以清楚地看到傳統儀器色譜中在0.73min時有一個去氨加壓素的色譜峰。以此測得靈敏度增加到原來的25倍。