24~48h需氧菌計數新方法

本文使用生物梅里埃TEMPO AC卡片，與培養溫度分別為35℃和32℃的AOAC 966.23、乳制品標準檢測方法（SMEDP）以及30℃的EN ISO 4833方法進行平行實驗檢測食品中的菌落總數。結果表明，對絕大多數食品樣本，TEMPO AC較傳統的平板計數法可以更早報告菌落總數的測試結果：35℃-22~28h（AOAC RI驗證）；30℃-24~28h（ISO 16140驗證）報告結果；對所有食品樣品在40~48h內報告結果。

在食品工業中，快速的質量控制方案對于貨架期較短的生鮮產品檢測來說至關重要，這其中也包括對總嗜中溫菌的定量計數檢測。及時、快速的檢測報告無疑能夠為食品生產商和檢測實驗室帶來更多益處和競爭力。

相比傳統方法 ISO 4833菌落總數 （Aerobic Plate Count APC-30℃-72h）以及BAM 966.23/SMEDP方法（Aerobic Plate Count- 35℃/32℃-48h）， 目前 TEMPO細菌總數（Total Viable Count） TVC卡片可以在2天內報告各種食品樣本（自身酶活性很強的食品除外）的細菌總數結果。TEMPO AC則可以在更短的時間內報告菌落總數結果，在35℃-22~28h（AOAC RI驗證），30℃-24~28h（ISO 16140驗證）報告結果，以及對所有樣品（包括自身高酶活性食品）在30℃-40~48h內報告結果。本文將這種新方法與 ISO以及BAM/SMEDP參考方法進行比較和分析討論。

材料與方法

材料選擇：選擇9種食品種類進行測試，包括乳制品、肉類/禽類、蛋類及其衍生產品、魚肉和海鮮產品、水果和蔬菜、谷類和堅果類、面包和糖果、多組分食品、寵物食品 （冷藏、冷凍、煮熟、脫水、煙熏或腌制加工）。試驗目的是選擇這一系列不同種類的食品樣本，特別是在TVC卡片局限性說明中提到檢測有難度的食品，如生紅內臟，生鮮軟殼動物，胡桃，榛子，杏仁，生面團，蛋糕粉，脫水湯包和調味包，香料等自身酶活性較強的食品，以此來驗證這些食品在TEMPO AC卡片上的使用性能。

本次試驗檢測了超過120個自然條件下受污染的樣品。使用TEMPO AC卡片與培養溫度分別為35℃和32℃的AOAC 966.23、乳制品標準檢測方法（SMEDP）以及30℃的EN ISO 4833方法進行平行實驗，并將數據進行統計和分析。

參考方法：NF ISO 4833方法（May 2003）APC，30℃±1℃/72h±3h或BAM 966.23/SMEDP方法（Aerobic Plate Count APC-35℃/32℃-48h）。每個測試樣品首先制備1:10的初次稀釋液，選擇合適的計數范圍做連續的10倍稀釋。每個稀釋度轉移1ml到無菌平板，傾注平板計數瓊脂（plate count agar，PCA）。

將平板放置在30℃培養72±3h 或者35℃/32℃培養48h±3h，并對培養后平板進行菌落計數并報告。

TEMPO AC方法：30℃±1℃/ 44h±4h或35℃±1℃/25h±3h。在TEMPO AC培養基瓶中加入3ml無菌水，再吸取1ml經過初次1:10稀釋的稀釋液（或合適的10倍稀釋液，這取決于樣品污染程度），將培養基瓶漩渦振蕩5s，之后使用TEMPO充填儀將稀釋液自動轉移到TEMPO AC卡片中并自動封口。將TEMPO AC卡片放置在30℃±1℃培養41h±1h到47h±1h 或在35℃/32℃±1℃培養24h±1h。達到培養時間后將AC卡片放入TEMPO讀數儀中讀取測試結果并自動打印最終報告。

結果與討論

由以上結果可以看出，TEMPO AC方法與傳統方法測試結果相比一致性為98.4%（表1）和95.6%（表2），兩種定量計數方法的偏差為0.06和-0.11（表1和表2）。

總體而言，自動化方法TEMPO AC與兩種經典的傳統方法測試結果相比無明顯差異，但要比傳統方法提前一天報告結果。

小結

使用自動化方法TEMPO AC與傳統方法（NF ISO 4833、AOAC 966.23以及乳制品標準檢測方法（SMEDP）檢測多種食品類型樣品（包括高酶活性產品）時， 檢測結果經比較后無顯著差異。而自動化方法用于食品指標菌檢測除具有高通量、可溯源、簡化工作流程以外，指標菌的報告時間可望由傳統方法的2~3天縮短為“明日”報告。