大腸菌群在檢測過程中的注意事項

二、大腸檢測過程錦囊知識分享

1.MPN法：大腸菌群的國標檢驗法采用三步法，即乳糖發酵、分離培養和證實實驗。

第一步乳糖發酵試驗室樣品的發酵結果，不是純菌的發酵試驗，所以初發酵陽性管經過后兩步，有可能成為陰性。大量檢驗數據證明，食品中大腸菌群檢驗程序的符合率、初發酵與證實試驗相差很大，不同食品三步法的符合情況也不一致。

2.平板法：第一做平板法的時候需要覆蓋第二層培養基，它的作用是：有助于典型菌落形成也為了防止蔓延性細菌生長。第二，挑菌，其實這一步主要怕挑菌的時候挑不到菌，其實你可以把帶菌的部分培養基完全挑起來（不要怕培養基包含著它出不來）放到BGLB內，然后用手腕力搖一下試管就可以把培養基打碎。

一般來說，如果平板上有較多典型大腸菌群菌落，革蘭氏染色為陰性桿菌，即可做出判斷。如果平板上菌落數較少或不夠典型，則應多挑菌落做證實試驗，以免出現假陰性。只做一步初發酵，對某些食品來說誤差較大。這樣做，會有相當部分的合格樣品被作為不合格樣品處理，應予以注意。

3.初發酵產氣量：在糖發酵試驗中經常可以看到，在發酵套管內存在極小的氣泡（有時比小米粒還小），類似這種情況能否算是產期陽性，這是很多人經常遇到的問題。大腸菌群的產氣量，多者可以使發酵套管充滿氣體，少者產生比小米粒還小的氣泡。一般來說，產氣量與大腸菌群檢出率呈正相關，但隨樣品種類而有不同，有米粒大小氣泡的也有陽性檢出。另外，對未產氣的乳糖發酵管是否均應做陰性處理，根據大量時間工作經驗來看，對這種情況應慎重考慮，有時會遇到在初發酵時產酸無氣，但復發酵卻證實為大腸桿菌陽性。有時套管內雖無氣體，但在液面及管壁可以看到緩緩上升的小氣泡。所以對未產氣的發酵管有疑問時，可以用手輕輕敲動或搖晃試管，若有氣泡沿管壁上浮，即考慮為有氣體產生，應做進一步試驗觀察。這種情況的陽性檢出率可達半數以上。

4.復發酵是為什么用BGLB呢？

從它的成分蛋白胨、乳糖、牛膽粉、煌綠來看，蛋白胨提供氮源，乳糖提供碳源并作為指示劑，牛膽粉(oxgall或oxbile)溶液抑制革蘭陽性菌生長煌綠水抑制革蘭陽性菌和部分陰性菌生長。

5.EMB平板（挑選菌落）：在檢驗方法中我們選用伊紅美藍平板為分離培養基，在該平板上，大腸菌群菌落大多呈紫黑色有金屬光澤或無金屬光澤。菌落形態的其他方面（如菌落的大小、光滑與粗糙、邊緣完整情況、隆起情況、濕潤與干燥）雖也應注意，但不如色澤方面更為重要。

挑取菌落數與大腸菌群的檢出率也有密切關系。在實際工作由于工作量較大，通常只挑取一個菌落，但影響大腸菌群檢出率的因素很多，如食品種類、菌落色澤和形態、細菌種類等，只挑取一個菌落，由于幾率問題，很難避免假陰性的出現，尤其當菌落不典型時。所以，挑取菌落時一定要挑取典型菌落，若無典型菌落則應多挑取幾個菌落，以免出現假陰性。

6.MPN檢索表使用

GB/T 4789.3-2003檢索表中陽性管數是以1mL(g)×3、0.1mL(g)×3和0.01mL(g)×3的梯度進行表示，GB 4789.3-2016陽性管數是以0.10、0.01和0.001的梯度表示,均按照稀釋倍數推算結果，結果相同。推算方法以GB 4789.3-2016為例，改用1g(mL)、0.1g(mL)和0.01g(mL)時，表內數字應相應降低10倍;如改用0.01g(mL)、0.001g(mL)和0.0001g(mL)時,則表內數字應相應增高10倍,其余類推即可。