核酸檢測革命：rpa技術原理

　　重組酶聚合酶擴增（Recombinase Polymerase Amplification，RPA），被稱為是可以替代PCR的核酸檢測技術。本專題為大家詳細介紹RPA的原理、引物設計、疑難解答以及在致病菌檢測、病毒檢測以及癌癥研究中的靈活應用。

　　自PCR技術誕生以來已經有三十年了，從經典PCR、實時定量PCR再到現在的數字PCR，這一技術在不斷蛻變卻從未淡出我們的視野。很多人的實驗根本離不開PCR。筆者曾經也接觸PCR很長一段時間，加樣、設置程序、等待、檢測。這些過程看起來容易，但實驗結果卻總是會出人意料，很多時候根本不知道是哪里出了錯。那么要是有一款技術，它比PCR更快速、便捷、高效，你會感興趣嗎？

　　RPA是什么？

　　基本原理

　　重組酶聚合酶擴增（Recombinase Polymerase Amplification，RPA），被稱為是可以替代PCR的核酸檢測技術。RPA技術主要依賴于三種酶：能結合單鏈核酸（寡核苷酸引物）的重組酶、單鏈DNA結合蛋白（SSB）和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性，zui適反應溫度在37°C左右。

　　重組酶與引物結合形成的蛋白-DNA復合物，能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就會發生鏈交換反應形成并啟動DNA合成，對模板上的目標區域進行指數式擴增。被替換的DNA鏈與SSB結合，防止進一步替換。在這個體系中，由兩個相對的引物起始一個合成事件。整個過程進行得非常快，一般可在十分鐘之內獲得可檢出水平的擴增產物。