1 液相色譜柱柱壓升高
2 液相色譜柱保留時間變化
3 氣相色譜峰拖尾、響應低甚至不出峰
4 液相分析樣品前處理
5 氣相分析樣品前處理
6 氣相色譜柱的老化
7 氣相色譜峰拖尾
8 液相色譜柱的維護
9 氣相色譜柱的維護
下面，讓我們逐一學習吧！
液相色譜柱柱壓升高
造成柱壓升高的可能原因有很多。一般是由于色譜柱篩板或柱頭發生了堵塞，造成流動相阻力加大所引起。當然色譜系統其他部分發生堵塞，也可能表現為柱壓（系統壓力）升高。所以在發現系統壓力升高時，可首先使用兩通短接色譜柱觀察相同條件下系統本壓是否正常，排除壓力升高為系統其他部分造成。
☆色譜柱篩板堵塞
這往往是由于流動相沒有過濾，或雖已過濾但濾膜孔徑過大或濾片損壞，使固體雜質滯留在篩板上造成的。可采用反沖的方法去除堵塞物。對于 5 或 3.5um填料的色譜柱，建議采用 0.45um 膜厚過濾樣品，1.8um 填料的色譜柱，請采用 0.2um膜厚過濾樣品。
同樣類似堵塞也會發生于排氣閥過濾芯、在線過濾器和保護柱，這時建議更換濾芯，在線過濾器內的篩板或保護柱內的柱芯。
☆非特異性吸附
當部分組分在柱子上有較強的非特異性吸附，且當前所用的流動相難以將它們洗脫時，強保留組分的累積則會造成阻力增大和壓力升高。可使用適當的溶劑沖洗以除去吸附物質。
☆樣品的沉淀
當樣品所用的溶劑與流動相不一致時，樣品進入柱中時有可能因溶解度降低而沉淀出來，造成壓力升高。此時建議使用對樣品有較高溶解度的溶劑沖洗。
☆鹽晶體的析出
使用較高濃度的緩沖液或添加有緩沖液的流動相后，如果沖洗不徹底，緩沖液中的無機鹽成分可能會殘留在體系之中。它們會因在新流動相體系中溶解度降低而析出，造成流動相阻力加大，壓力升高。
☆更換流動相時置換不徹底
當改換流動相體系時，不徹底的更換使不同性質、互不相溶的流動相存在一個體系中，也會造成壓力升高。可使用混溶的溶劑（異丙醇）徹底沖洗。
液相色譜柱保留時間變化
保留時間不重現可能由多種因素引起，通常還會影響到峰面積的重現性，建議檢查以下幾個方面：
☆確認流動相是新鮮配制的，比例沒有錯誤。比如一些揮發性的溶液，如乙酸，最好及時更換。
☆確認色譜條件在色譜柱使用范圍之內，如 pH 范圍、溫度、壓力。
☆仔細觀察柱前壓的變化，如果壓力穩定，就可以判斷泵的系統沒有問題；如果是壓力不穩定，一定會影響保留時間，這種狀況通常是由于泵頭里有氣泡造成的。請將流動相仔細脫氣，并排出泵內氣泡。
☆觀察色譜峰形、柱效變化情況，確認色譜柱是否被污染，如果確定色譜柱污染，可嘗試使用適當溶劑沖洗。
☆如果同時伴有色譜柱柱壓升高，解決方法請參見“液相色譜柱柱壓升高”部份。
☆如果使用梯度洗脫方法，請確認平衡時間足夠長。流動相中使用離子對試劑（烷基磺酸鈉等）或固定相為正相硅膠等，往往需要更長的平衡時間。
☆確認樣品是否過載，減少進樣量（進原進樣量的 10%確認）。
☆組分在色譜柱中保留不夠。調整色譜條件，使樣品在柱上適當保留。
氣相色譜峰拖尾、響應低甚至不出峰的主要原因
☆ 系統污染、惰性下降
系統惰性不好對活性組分峰形及響應的影響尤為明顯。建議選用惰性優異的低流失色譜柱和色譜耗件，如去活的襯管。如果系統已經被污染，應及時對進樣口和檢測器進行維護。
恢復被污染色譜柱的方法主要有：
將進樣口端截去 0.5~1 米，根據樣品來源做進一步的判斷，如果是半揮發污染物，還可以進一步考慮對色譜柱進行老化。污染嚴重時可截去更長或用溶劑徹底清洗色譜柱（必需是交聯鍵合固定相）
☆ 色譜柱安裝不正確或系統其他部位存在死體積
毛細管柱在進樣口和檢測器的安裝位置不當將影響峰形，請嚴格按照儀器的使用說明正確安裝色譜柱。其他與毛細管柱相連接的部位也應注意降低死體積。
☆ 系統漏氣
需定期檢查系統氣密性、更換進樣口備件。使用非純石墨密封圈時，注意安裝后的幾次溫度升降之后追加一次擰緊。
☆ 方法條件不佳
對于低揮發性樣品，需注意提高進樣口和/或檢測器、色譜柱、傳輸管線等處的溫度，防止冷凝現象。
有些樣品在某些檢測器的響應確實不高（甚至沒有響應），如果樣品不出峰，又沒有參考響應值，應加大進樣量確認出峰位置，并利用標樣考查樣品的響應值。
☆ 其他可能導致峰拖尾的原因
◇不分流模式下，分流放空閥開啟過晚（通常應在 0.5~1.0 分鐘之間）
◇ 手動進樣速度過慢
◇ 檢測器尾吹氣流量不足
◇ PLOT 色譜柱樣品過載
◇ 組分共流出
◇ 含磷化合物在 NPD 白色銣珠上易拖尾，建議使用黑色銣珠。
液相分析樣品前處理
進樣上柱的樣品必須是可重現的均質溶液，樣品前處理是為了盡可能除掉對分析有干擾的雜質，保證好的重現性及不損害色譜柱，且能與 HPLC 色譜條件相兼容。
☆溶劑
溶解樣品的溶劑應該能溶于流動相而不影響樣品的保留值和分離度，最好使用流動相溶解樣品或使用比初始比例流動相洗脫能力更弱的溶劑來溶解樣品。當樣品所用的溶劑與流動相不一致時，應避免樣品進入柱中時因溶解度降低而導致沉淀。
未溶解的或含顆粒物的樣品溶液會造成堵塞，進樣前一定要使用合適的濾膜過濾。
☆進樣量
在分析級色譜中，加到色譜柱上的樣品量一般是 ug 水平，也可以更少。如果樣品溶液濃度過大，可通過稀釋降低溶液中被測物的濃度，以避免色譜柱超載或檢測器超限。進樣體積也應該盡量小，避免由于體積過載對分離造成不良影響。
為了適應檢測靈敏度的需要，某些痕量分析需要將樣品濃縮、富集。
☆樣品純度
可根據樣品性質和分離目的，使用固相萃取（SPE）、溶劑萃取等其他樣品前處理手段，最大程度去除干擾物質或色譜柱“殺手”干擾物，達到純化和富集目標化合物的目的，同時延長色譜柱使用壽命。
組分非常復雜的樣品往往需要預分離為簡單的片段避免色譜峰過分重疊。
氣相分析樣品前處理
氣相色譜所能分析的樣品應是可揮發的、且是熱穩定的，沸點一般不超過 500℃。
☆樣品要求
GC 能直接分析的樣品必須是氣體或液體。固體樣品在分析前應當溶解在適當的溶劑中，或是通過特殊的進樣技術（如頂空進樣和裂解進樣）進行間接分析。
直接分析的樣品要保證樣品中不含不揮發的組分（如無機鹽）或可能損壞色譜柱的組分(如無機酸和堿：鹽酸、硫酸、硝酸、磷酸、全氟酸、CrO3、氫氧化鉀、氫氧化銨、氫氧化鈉)。除了無機酸和堿外，交聯鍵合的色譜柱對于化學品都有較好的惰性。
☆溶劑
丙酮、己烷、氯仿等是 GC 常用的溶劑，一般來說，溶劑應具有較低的沸點，從而使其容易與樣品分離。溶劑選擇還應考慮到所使用的檢測器，如 ECD 檢測時，不適宜使用鹵代溶劑；水不宜進入 MSD、NPD 和 ECD。
☆進樣量與純度
如果采用毛細管柱分析，應注意樣品的濃度不要太高，以免造成柱超載，通常樣品的濃度為 mg/ml 級或更低。
如果樣品中有不能用 GC 直接分析的組分，或者樣品濃度太低，就必須進行必要的預處理，包括采用一些預分離手段，如各種萃取技術（SPE）、濃縮、提純等方法。
氣相色譜柱的老化
☆開管涂壁(WCOT)
△老化目的
烘烤去除色譜柱表面的污染物（隨樣品或載氣進入和冷凝下來的污染物、降解的固定相碎片），以獲得干凈而平穩的基線。
△老化步驟
老化前接好色譜柱，接通載氣并確保系統無漏氣。通常來講，將色譜柱連接在檢測器上進行色譜柱老化是安全的, 并不會污染檢測器。只是對于高靈敏度檢測器（如MSD 和 ECD），最好不將色譜柱連接檢測器進行老化。老化時將爐溫逐漸升至（升溫速率沒有具體限制，可以參考將進行的分析條件，建議使用比具體實驗條件更快的升溫速率）老化溫度，然后在老化溫度下持續老化。
△老化溫度
可以參考將進行的分析條件，可在方法的最高溫度基礎上加 20 度（但不得超過色譜柱的恒溫溫度上限）進行老化；如果尚無分析方法，可在色譜柱的恒溫溫度上限減２０度進行老化。
△老化時間
老化時間主要取決于應用分析對靈敏度要求以及操作者可接受的流失程度。對于 WCOT 色譜柱，通常推薦的老化時間為 2~3 個小時。當方法對靈敏度的要求較高、固定相的極性較強或膜厚較厚時，老化時間需要適當延長。
△如何判斷色譜柱已經老化充分
色譜柱老化之后，可利用流失曲線來檢查是否已老化充分。流失曲線是在不進樣情況下運行程序升溫所獲得的色譜圖。正常的流失曲線（如下圖）隨溫度升高平滑上升，且沒有明顯雜峰。
☆開管多孔層(PLOT)
ＰＬＯＴ柱與 WCOT 柱的老化方法不盡相同，主要區別在于：
△首先安裝ＰＬＯＴ柱于進樣口，然后以 2~3psi/min 的速度逐漸增加到建議流速：(內徑0.32 mm: 2 to 4 mL/min； 0.53 mm: 6 to 9 mL/min)
△在接上檢測器之前，在室溫下用載氣吹 3～5 分鐘，吹去固定相表面已脫落或不穩固的顆粒。
△在沒有超過色譜柱最高使用溫度下老化色譜柱
氣相色譜峰拖尾的原因
A）色譜柱污染
如果色譜柱開始使用時峰形正常，使用一段時間后逐漸出現峰拖尾，則色譜柱被污染的可能性很大，這時需要對色譜柱加強沖洗，即使用比方法流動相更強的溶劑沖洗色譜柱。
建議做好樣品前處理，但如果前處理后依然比較臟，強烈建議配置保護柱。一旦峰形變差，柱效下降，應及時更換保護柱芯。
B）柱外死體積
較大的柱外死體積會導致峰形擴展和峰拖尾，建議仔細檢查樣品經過的所有管路及各連接部位，請使用合適的管線和接頭。
C）樣品過載
D）樣品溶劑過強
樣品溶劑的強度應不高于流動相的洗脫強度。最好使用流動相溶解樣品或使用比初始比例流動相洗脫能力更弱的溶劑來溶解樣品。
E）組分共流出
如果一小峰包含在一大峰后面，這一共流出的峰會顯現為拖尾峰。需要做好色譜條件的優化，有條件時可利用ＤＡＤ檢查峰純度。
F）流動相的 pＨ在樣品 pKa 附近
流動相的 pH 在樣品的 pKa 附近時，樣品解離平衡不充分，容易出現前伸峰或拖尾峰。所以流動相的 pＨ應盡量選在樣品 pＫa ± １.5 以外
G）色譜柱填料表面的惰性不夠好
鍵合硅膠型填料表面的殘留硅羥基或金屬雜質易與待測化合物發生二次作用而導致拖尾。
建議：
△ 選用高純硅膠合成填料的色譜柱以及進行了有效硅羥基封端填料色譜柱。
△ 或降低流動相 pＨ，抑制硅羥基解離
△ 或流動相中添加減尾劑，如三乙胺
△ 或使用不同的有機相溶劑
液相色譜柱的維護
A) 正確的安裝
△請注意不同儀器的接頭，尤其是不銹鋼接頭。
△ 安裝時力度適中，確保流動相經過時不會有漏液產生，同時不要太緊，防止出現管線“卡”在色譜柱上的情況發生(尤其是不銹鋼接接頭，一般以用手擰緊后，再用扳手擰上1/4~1/2 圈為宜)
B) 正確的使用
△使用前認真閱讀色譜柱使用說明書
△注意色譜柱的 pH 適用范圍、溫度及壓力上限
△使用色譜級的有機溶劑
△使用新鮮配置的流動相
△ 使用經過濾和脫氣的流動相
△較“臟”樣品使用保護柱或在線過濾器
△ 定期用強溶劑沖洗色譜柱 (色譜柱內說明書均有相應的建議)
△定期做好色譜柱測試及記錄工作 (每個色譜柱包裝盒內均有柱效測試報告
C) 正確的保存
△使用之后認真沖洗色譜柱 (如果流動相使用了緩沖鹽體系，建議在沖洗時將緩沖鹽一相換成相同比例的純水相，沖洗 10～15 倍柱體積后，換成純有機相沖洗)
△使用之后將色譜柱保存于適合的溶劑中
氣相色譜柱的維護
A) 正確的安裝，好的開始是成功的一半！
△ 區分進樣口端與檢測器端，鐵標簽上的字正對安裝者。
△ 確保進樣口的潔凈度，如有污染，請更換襯管和分流平板。
△ 正確切割毛細管柱
△ 安裝之后做好柱配置（EPC 系統，輸入色譜柱規格后，請進行柱長校正）
△ 對新色譜柱進行適度老化
B) 正確使用
△ 請勿劃傷色譜柱表面的聚酰亞胺涂層，因此不要將色譜柱與尖銳的表面直接接觸。
△ 注意色譜柱盒包裝側面的溫度上下限。
△ 確保密封無漏氣 (使用純度高的載氣，新的進樣隔墊，規格合適的密封圈都是必需的)
△ 做好樣品前處理，防止將不揮發的物質及對色譜柱傷害較大的化合物(如：無機酸和堿)
引入色譜柱中，如果無法將這此物質在進樣前除去，請在分析柱前接保護柱。
C) 正確保存
△ 氣相色譜柱不使用時，請從 GC 上卸下，并用舊的密封隔墊將其兩端封住。下一次使用時，需要把色譜柱兩端修整掉 2-4cm，以確保隔墊碎屑不會堵塞色譜柱。
△ 如果把色譜柱留在加熱的 GC 中，一定要保證始終有載氣通過氣相色譜柱。