水生動物病毒基因組DNA／RNA提取試劑盒使用說明

水生動物病毒基因組DNA/RNA提取試劑盒

一、簡介

水生動物病毒基因組DNA/RNA提取試劑盒適合于快速從水生動物組織勻漿液中提取高純度的病毒基因組核酸。試劑盒基于硅膠柱純化技術，提取過程中無需使用有毒的酚氯仿抽提，也無需進行耗時的醇類沉淀，獲得的核酸可直接用于PCR/RT-PCR、Sorthern雜交/Northern雜交、以及LAMP/RT-LAMP等系列下游實驗。

• 原理

本試劑盒采用的硅膠柱以高結合力的玻璃纖維濾膜為基質。濾膜在高濃度離子化劑(如鹽酸胍或異硫氰酸胍)條件下，可通過氫鍵和靜電等物理化學作用吸附核酸，而蛋白質和其它雜質則不被吸附而去除。吸附了核酸的濾膜經洗滌去除殘留的蛋白質和鹽，最后可以用DEPC處理水洗脫濾膜上吸附的核酸，得到的核酸純度高，可直接用于各種下游實驗。

水生動物病毒基因組DNA/RNA提取試劑盒基于硅膠柱純化方式。樣品在裂解液中裂解，核酸釋放到裂解液中。在高鹽的環境下通過硅膠柱，核酸被吸附在硅膠柱的膜上，而蛋白質則不被吸附而去除。后經洗滌液洗滌去除鹽分，最后核酸被無核酸酶洗脫液洗脫。

三、組成

注意：洗滌液在初次使用前加入40ml無水乙醇，并于室溫保存。

四、保質期

水生動物病毒基因組DNA/RNA提取試劑盒組份可在室溫下（15-25℃）干燥保存12個月。長期保存時需置于2-8℃。

五、需要準備的材料和工具

• 無菌生理鹽水

• 無水乙醇

• 潔凈的鑷子和剪刀

• 勻漿機、均質袋或一次性研磨棒

• 微量移液器（100-1000μl，10-100μl）

• 無DNase和RNase的滅菌離心管（1.5ml或2ml）

• 無DNase和RNase的滅菌Tip頭

• 渦旋振蕩器

• 離心機（轉速≥10,000rpm）

六、從水生動物病毒中快速提取DNA/RNA的方法

該方案采用離心操作，適合于快速從水生動物組織樣品中提取病毒基因組DNA/RNA。以下步驟都在室溫下進行。

• 取適量待檢新鮮樣品組織加入1~5倍體積的生理鹽水進行勻漿。取至少500μl勻漿液至1.5ml離心管中。

• 10,000rpm離心5min去除宿主細胞組織核酸。

• 取100μl上清液至新的離心管中，加入300μl裂解液至上清液中，顛倒混勻，靜置5-10min裂解病毒。

• 加入200μl無水乙醇至裂解液中，渦旋混勻20秒。

• 把管 A裝在2ml管B中，將裂解液全部轉移至管 A中，10,000 rpm離心1min。

• 倒棄管B中的濾液，把管 A裝回管B中，加入400μl洗滌液至管 A中，10,000 rpm離心1min。

• 重復步驟6。

• 倒棄管B中的濾液，把管 A裝回管B中，10,000rpm離心3min。

• 把管 A裝在新的1.5ml離心管中。

• 加入30-50μl洗脫液至管 A中，靜置1-2min，10,000rpm離心1min，所得溶液即為病毒基因組核酸溶液。若暫時不用，于-80℃儲存。

七、常見問題解答

該列表可能有利于您解決在提取過程中所碰到的問題。若您對試劑盒存在疑問或有良好的建議，又或者您在分子生物學實驗中碰到問題，都請您聯系我們。我們將竭盡所能為您排擾解難。