相反，在陽性對照實驗中，TA肌損傷模型中他莫昔芬誘導后可以很容易地檢測到tdTomato+ZsGreen-肌細胞（箭頭，圖3M），而假手術組沒有。
圖3.
綜合上述結果，第2種策略使用Tnnt2-Cre;R26-DreER;IR3也顯示出與策略1一致的結果：非心肌細胞在胚胎心臟和成體骨骼肌中轉化為肌細胞，但在成體心臟中對肌細胞沒有貢獻。
策略3 Tnni3-Dre;R26-iCre;IR1
為了進一步驗證上述發現，使用另一種肌細胞Marker——TNNI3來驅動Dre重組酶。 Tnni3-Dre在成體心臟中有效且特異性標記肌細胞，但不標記非肌細胞。利用Tnni3-Dre;R26-iCre;IR1小鼠，分別標記肌細胞和非肌細胞（圖4A）。
圖4. A
通過ZsGreen、tdTomato和不同心臟細胞譜系marker的免疫染色顯示肌細胞表達tdTomato、非肌細胞（例如內皮細胞、成纖維細胞等）表達ZsGreen（補充材料）。不給予Dox誘導的情況下，在Tnni3-Dre;R26-iCre;IR1小鼠中未觀察到ZsGreen+細胞組織（圖4B）。
給予Dox后兩周，進行MI或BaCl2注射（圖4C），結果發現在假手術的心臟中，Dox誘導后使tdTomato+心臟細胞也被標記上ZsGreen綠色熒光（圖4D）。tdTomato、ZsGreen和TNNI3的免疫染色顯示所有心肌細胞均為tdTomato+ZsGreen-（圖4E）。MI造模后，梗塞的心臟組織中tdTomato+肌細胞數量明顯減少，被ZsGreen+非肌細胞替代（圖4F）。
分離MI造模后的心肌細胞體外觀察均為tdTomato+ZsGreen-細胞（圖4G）。 tdTomato、ZsGreen和TNNI3免疫染色顯示ZsGreen+細胞在損傷后并沒有轉向心肌細胞命運（圖4H，I）。通過分流式細胞分析和RT-PCR沒有檢測到MI心臟中有任何ZsGreen+tdTomato-肌細胞（圖4J，K）。
相反，在陽性對照實驗中，在損傷的TA肌肉中可以檢測到ZsGreen+tdTomato-肌細胞（箭頭，圖4L），表明非肌細胞新生為肌細胞。
圖4.
所以，基于Tnni3-Dre;R26-iCre;IR1的第3種模型也揭示了在成體心臟中非肌細胞并不轉化為肌細胞。