一文了解常見色譜分類

　　1906年Tswett 研究植物色素分離時提出色譜法概念；他在研究植物葉的色素成分時，將植物葉子的萃取物倒入填有碳酸鈣的直立玻璃管內，然后加入石油醚使其自由流下，結果色素中各組分互相分離形成各種不同顏色的譜帶。按光譜的命名方式，這種方法因此得名為色譜法。以后此法逐漸應用于無色物質的分離，“色譜”二字雖已失去原來的含義，但仍被人們沿用至今。

　　在色譜法中，靜止不動的一相（固體或液體）稱為固定相（stationary phase） ；運動的一相（一般是氣體或液體）稱為流動相（mobile phase）。

　　色譜法（chromatography）又稱色譜分析、色譜分析法、層析法，是一種分離和分析方法，在分析化學、有機化學、生物化學等領域有著非常廣泛的應用。常見的色譜法主要有：柱色譜法、薄層色譜法、液相色譜法、氣相色譜法、超臨界流體色譜法。

　　1、柱色譜法

　　原始的色譜方法，該方法將固定相注入下端塞有棉花或濾紙的玻璃管中，將被樣品飽和的固定相粉末攤鋪在玻璃管頂端，以流動相洗脫。

　　常見的洗脫方式有兩種：一種是自上而下依靠溶劑本身的重力洗脫，另一種：自下而上依靠毛細作用洗脫。

　　收集分離后的純凈組分也有兩種不同的方法：一種方法是在柱尾直接接受流出的溶液，另一種方法是烘干固定相后用機械方法分開各個色帶，以合適的溶劑浸泡固定相提取組分分子。柱色譜法被廣泛應用于混合物的分離，包括：對有機合成產物、天然提取物以及生物大分子的分離。

　　2、薄層色譜法

　　應用非常廣泛的色譜方法，這種色譜方法將固定相涂布在金屬或玻璃薄板上形成薄層，用毛細管、鋼筆或者其他工具將樣品點于薄板一端，之后將點樣端浸入流動相中，依靠毛細作用令流動相溶劑沿薄板上行展開樣品。薄層色譜法成本低廉、操作簡單，被用于對樣品的粗測、對有機合成反應進程的檢測等用途。

　　3、液相色譜法（HPLC）

　　目前，應用多的色譜分析方法，液相色譜系統由流動相儲液瓶、輸液泵、進樣器、色譜柱、檢測器和記錄器組成，其整體組成類似于氣相色譜，但是，針對其流動相為液體的特點作出很多調整。HPLC輸液泵要求輸液量穩定平衡；進樣系統要求進樣便利、切換嚴密；由于液體流動相黏度遠遠小于氣體，為了減低柱壓，液相色譜的色譜柱一般比較粗，長度也遠小于氣相色譜柱。HPLC應用非常廣泛，幾乎遍及定量定性分析的各個領域。

　　4、氣相色譜法

　　氣相色譜法是將氦或氬等氣體作為載氣(稱移動相)，將混合物樣品注入裝有填充劑(稱固定相)的色譜柱里，進行分離的一種方法。分離后的各組分經檢測器變為電信號并用記錄儀記錄下來。氣相色譜法近20年發展很快，種類很多，通常有五部分組成：(1)氣源包括載氣、燃燒器、助燃氣、氣體的凈化和流量控制系統；(2)進樣系統包括氣化室和注射器等；(3)色譜柱是氣相色譜的心臟，它又分為裝有填充劑的填充柱和非常細的毛細管柱；(4)檢測器；(5)記錄儀或電子計算系統。

　　5、超臨界流體色譜法

　　超臨界流體色譜(supercritical fluid chromatography；SFC)以超臨界流體做流動相是依靠流動相的溶劑化能力來進行分離、分析的色譜過程，是20世紀80年代發展和完善起來的一種新技術。

　　超臨界流體色譜兼有氣相色譜和液相色譜的特點。它既可分析氣相色譜不適應的高沸點、低揮發性樣品，又比液相色譜有更快的分析速度和條件。操作溫度主要決定于所選用的流體，常用的有二氧化碳及氧化亞氮。超臨界流體容易控制和調節，在進入檢測器前可以轉化為氣體、液體或保持其超臨界流體狀態，因此可與現有任何液相或氣相的檢測器相連接，能與多種類型檢測器相匹配，擴大了它的應用范圍和分類能力，在定性、定量方面有較大的選擇范圍。還可以用多種梯度技術來優化色譜條件。并且比液相色譜法易達到更高的柱效率。