隨機引物是指當特定mRNA由于含有使逆轉錄酶終止的序列而難于拷貝其全長序列時,可采用隨機六聚體這一非特異的引物來拷貝全長mRNA。
1.特異性引物一般在增低豐度目的基因才選擇使用,用得比較少。一般都推薦用Oligo(dT)或隨機引物代替基因特異性引物。由于rna的二級結構破壞不完全,導致特異性引物和其退火難度較大。當PCR 引物定位于RNA 5’-末端時使用隨機引物則更加合適。
2.關于擴增長片段問題,除了引物的問題外,酶的選擇和rna的質量也很重要。現在很多公司提供長程酶,對擴增長片段有較好的效果。其次是不能破壞rna的結構,提取時動作要溫和。