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  • 發布時間:2020-05-11 10:28 原文鏈接: 新一代SPR技術在鈣調蛋白與NOS研究中的應用(二)

    蛋白結合分析:將NOS固定OpenSPR的納米金芯片表面,并對CaM做濃度梯度檢測,結果導入TraceDrawer分析。

    (圖4 )OpenSPR實時檢測,梯度稀釋后不同濃度檢測出野生型CaM對nNOS(紅線)和eNOS 肽(紫紅線)的結合情況,觀察結合、解離及再生的整個過程,結果顯示實驗曲線穩定及信號顯著。

    (圖5) 不同突變的CaM 與cNOS結合數據導入TRACE  DRAWER 軟件分析,獲取Koff、 Kon及 KD值,結果如下:

    結果顯示:CaMcc與cNOS 的親和力高于wt CaM,相對wt CaM,所有突變型的CaM除了nCaM及CaMcc,與NOS解離速率都加快,并且結果與之前傳統方法得出只有CaMc能激活NOS,其他激活效果差或不激活的結果一致,也有效的證明了OpenSPR 在CaM 與cNOS結合研究中的準確性,并且檢測方法簡單,數據結果豐富,首次闡述了CaM激活cNOS激活機制是因CaM發生了EF手性對突變,利用這個方法下一步繼續驗證CaM激活eNOS及iNOS 的機制。

    (1)Alderton etal.Biochem.J. (2001)357:593

    (2) Babu YS,Bugg CE ,Cook  WJ:J.Mol.Bio.(1988)204:191-204

    (3) Spratt.D.E.et FEBS(2006)273,1759-1771

     

    Nicoya OpenSPR個人型分子互作儀優勢:

    ·實時無標記

    ·實驗周期短:15min出結果,

    ·操作簡單---半個小時即可掌控

    ·實驗成本低---低成本儀器及芯片

    ·高檢測效率---上樣、出結果、一鍵式分析

    ·豐富的檢測數據:Ka、Kd、KD等

     


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