前言
強制降解實驗能揭示各種環境因素對原料藥和制劑的影響。它能提供藥品安全信息、確定推薦儲存條件、保質期和分析方法的特異性。而降解產物的信息能幫助改進化合物或配方的發展。
霉酚酸酯（MMF）的商標名稱為驍悉（CellCept），是一種免疫抑制劑和霉酚酸（MPA）的前體藥物。 MMF 廣
泛的應用在治療器官移植排異反應和自體免疫疾病的移植藥物中。本研究選擇 MMF 作為模型化合物。
本文開發了一種快速可靠的分析霉酚酸酯降解產物的完整工作流程，使用的儀器是賽默飛世爾科技的 AccelaTM
UHPLC
系統和臺式 Orbitrap Q Exactive FocusTM 質譜儀，數據處理采用 Mass FrontierTM
軟件。霉酚酸酯在熱和過氧化物催化下的降解研究的 pH 值設定為 2.0、 3.5、 6.0 和 8.2。采用 HRAM
全掃描和數據依賴MS/MS 在高分辨率和極性切換模式下實現降解產物的快速鑒定。 HRAM MS 和 MS/MS 譜圖以及正 /
負離子模式切換，能可靠完成降解產物的定性和結構鑒定。
實驗方法
材料與試劑
霉酚酸酯 API CAS# 128794-94-5 購自 2A PharmaChem（Lisle， IL），純度 >98%。
霉酚酸酯降解產物標準品
霉酚酸， CAS# 24280-93-1 Sigma-Aldrich。
霉酚酸酯雜質 G， CAS# 224052-51-1， Molcan Corporation，加拿大多倫多
霉酚酸酯雜質 A， CAS# 1322681-36-6， Molcan Corporation，加拿大多倫多
鹽酸、乙酸銨、氫氧化鈉和過氧化氫購自 Sigma-Aldrich。
樣品前處理
● 霉酚酸酯儲備液，濃度為 2.5 mg/mL 的乙腈溶液，稱取 25 mg 標準品配制在 10 mL 乙腈中。
● 鹽酸（0.01 N， pH 2），乙酸銨（5 mM， pH 6），氫氧化鈉（0.01 N， pH 8）和過氧化氫（3%， pH 8.2）。購買的 30% 過氧化氫用水稀釋 10 倍后用于酸、堿和氧化研究。用氫氧化銨或乙酸調節強制降解溶液 pH 值。
●
用如上 pH 2、 pH 6、 pH 8 的溶液和過氧化氫（3%， pH 8.2）將濃度為 2.5 mg/mL 的霉酚酸酯儲備液稀釋
10倍配制濃度為 0.25 mg/mL 的強制降解溶液。強制降解溶液放置于 60℃烘箱中。在放置的第 1、 20、 48 和
72小時分別取樣，直接進樣到 LC/MS 中進行分析。
HPLC 方法
HPLC 系統： Thermo Scientific Accela 1250 pump, Open Accela Autosampler and Accela PDA
色譜柱： Thermo Scientific Dionex Acclaim 2.1×150 柱 , 2.2 μm
柱溫箱溫度： 35℃
流動相：A - 0.1% 甲酸水溶液
B – 含 0.1% 甲酸的乙腈
C - 100 mM 甲酸銨的水溶液（pH 5）
梯度洗脫： 0-0.5 min 保持 20% B，然后在 15 min 內線性增加到 40%B
流速： 500 μL/min
進樣體積： 1 μL
質譜方法
質譜儀： Thermo Scientific Q Exactive Focus 臺式高分辨質譜
儀，配備 HESI-II 離子源
離子化模式： ESI 正 / 負離子切換
全掃描采集： m/z 120-1000 amu，分辨率為 70,000（FMHW@m/z 200）
MS/MS 采集： 35,000 分辨率下響應強度數據依賴采集
HCD 碰撞能量： 35%， 25% 階梯變化
結果與討論
I. UHPLC- 高分辨率 MS 快速測定降解產物
采用 UHPLC- 高分辨率 MS 快速分析降解產物。高質量的 HRMS 全掃描圖譜為測定降解產物的元素組成提
供了重要信息，并從隨后的數據依賴 MS/MS 獲得分子離子的裂解信息。
