1.引言
替加環素（Tigecycline）又名9- 叔丁基甘氨酰胺基米諾環素、丁甘米諾環素，是首個被批準用于臨床的靜脈內給藥的甘氨酰四環素類抗生素，具有超廣譜的抗菌活性，包括革蘭氏陽性和革蘭氏陰性的好氧菌及厭氧菌等臨床分離的重要致病菌。替加環素的作用機制與四環素類抗生素相似，都是通過與細菌30S 核糖體結合，阻止轉移RNA的進入，使得氨基酸無法結合成肽鏈，最終起到阻斷細菌蛋白質合成，限制細菌生長的作用。替加環素能夠克服或限制細菌的外排泵和核糖體保護兩種耐藥機制的作用，不易產生耐藥性，其廣泛的組織分布和較長的清除半衰期的藥動學性質令人樂觀；同時對于腎功能紊亂及需進行血液透析的患者，不必進行劑量和時間上的調整。2005 年6 月美國FDA 批準用于成人復雜皮膚及軟組織感染和成人復雜的腹內感染，但在國內尚處于臨床研究、申報生產階段。
本實驗建立了測定血漿中替加環素的LCMSMS 方法，采用適當的樣品前處理方法，血漿中的雜質不干擾樣品的測定，具有靈敏度高，重現性較好等特點。
2．實驗部分
2.1 儀器與試劑：
TSQ Vantage 三重四極桿串聯質譜儀（賽默飛世爾科技Thermo Fisher Scientific 公司），配置有電噴霧電離源（ESI）；Dionex Ultimate 3000 RSLC 超高壓液相色譜。
標準品：替加環素和內標鹽酸四環素純度均大于98％，信息見表1。用甲醇溶解并配制成1.0 mg/mL 標準儲備液，再根據需要稀釋成適當濃度的混合標準工作液。其他試劑均為HPLC 色譜純。
表1. 待測化合物信息
2.2 儀器方法：
2.2.1 液相條件：
色譜柱：Hypersil GOLD C18，100mm×2.1mm；
梯度洗脫程序見表2，進樣量5μL。
表2. 液相色譜梯度條件
時間/min | 水(0.2%甲酸+5mM甲酸銨) | 乙腈 | 流速/μL/min |
0.00 | 95 | 5 | 400 |
3.00 | 20 | 80 | 400 |
3.50 | 20 | 80 | 400 |
3.60 | 95 | 5 | 400 |
5.00 | 95 | 5 | 400 |
2.2.2 質譜條件：
電噴霧電離源（ESI），正離子模式；選擇反應監控（SRM）掃描模式，噴霧電壓：3000V；氣化器溫度320℃，離子傳輸管溫度：350℃；氮氣作為鞘氣和輔助氣，其中鞘氣為35arb，輔助氣為10arb，氬氣用作碰撞氣, 碰撞壓力為1.5mTorr；選擇反應監測（SRM），離子對信息見表3。
表3. SRM 模式中的離子對信息
其中，替加環素選取m/z 513.2，四環素選取m/z 410.2 的離子作為定量離子。
2.3 血漿樣品處理方法：
向0.2mL 血漿中加入10μL 內標液（100ng/mL 四環素溶液），加入100μL20% 三氯乙酸（TCA） 沉淀蛋白， 渦旋混合1min，離心10min（13000r/min），取5μL 上清液進樣分析。