1. 這些工作均是在 Ralph M.Steinman的參與下完成的;
2. Inaba培養的BMDC來源于小鼠股骨和脛骨中的骨髓;
3. Inaba先用抗體+補體法去除骨髓中的淋巴細胞,以防淋巴細胞對BMDC培養的影響;
4. 在誘導分化過程中,為防止粒細胞的干擾,Inaba通過每2天輕搖培養板并3/4體積換液的方法來盡量去除粒細胞;
5. Inaba證實單用GM‐CSF通過6‐8天的培養,即可從骨髓細胞誘導得到 大量的 DC 細胞,而且混合淋巴細胞反應提示其為成熟的 DC 細胞;
6. 該法可從一個小鼠的骨髓中培養獲得5‐7 x 106個DC細胞。
1994年---奧地利因斯布魯克大學(University
of Innsbruck)的Romani等發現GM-CSF和IL-4(白細胞介素 4)聯合誘導,可從人血液
PBMC(外周血單個核細胞)制備出大量的DC,而GM-CSF單獨誘導的效果不好[4].后來,科學家也將IL-4應用于小鼠BMDC的培養[5,6].
1999年----德國明斯特大學(University
of Munster)的Labeur研究表明,單獨用GM-CSF誘導的BMDC為未成熟DC(immature DC,
iDC),GM-CSF和IL-4聯合誘導出來的BMDC的成熟度居中,添加CD40L或LPS可進一步誘導DC完全成熟,即成熟 DC(mature
DC, mDC)[7].
1999年---德國埃爾朗根大學(University of
Erlangen)的Lutz開發出一種可獲得超大量BMDC的方法,每只小鼠可獲得的BMDC的數量Inaba 經典方法的50倍之多,達1-3
x108個DC細胞/小鼠[8].該法被DC研究者廣泛認可和使用。
1. 骨髓不作任何預先處理;
2. 使用細菌培養皿(Petri Dish)替代細胞培養板;
3. 細胞的初始鋪板密度低,為 2 x 105/ml;
4. 培養時間延長至10‐12天;
5.仍僅用GM‐CSF誘導,但第8天或第10天后減量使用;
6.第6天和第8天半量換液,但吸出的懸浮細胞離心后放回原板。
2002年---美國匹茲堡癌癥研究院大學(University of Pittsburgh Cancer
Institute(UPCI))的Son也研發出一種超大量BMDC培養方法,稱為 bulk-culture
method.該法每只小鼠可獲得的BMDC的數量是Inaba經典方法的7-10倍,即3 – 4 x
107個BMDC,而且培養時間與Inaba經典方法相似,僅需7天[9].
1. 骨髓取出后僅溶血,不做任何其它處理;
2. 使用6孔培養板培養;
3. 培養過程中使用GM‐CSF+IL‐4聯合誘導;
4. 培養的第4天和第7天補加足量的GM‐CSF和IL‐4;
摘自文獻 Son YI, et al. J Immunol Metods. 2002; 262(1-2): 145-57 [9]