4. DC 細胞的培養及鑒定
4.1 步驟 3.2 中剩下的貼壁細胞 （主要是 CD14+的單核細胞），加入含重組人 GM-CSF500-1,000U/ml 和重組人 IL-4 500U/ml 的無血清培養液，37℃，5%CO2 培養箱中 培養，誘導單核細胞向 DC 細胞分化。
4.2 每 3d 半量換液一次，并補足細胞因子；
4.3（可選步驟） 在培養的第 5d, 加入步驟 2 中獲得的腫瘤抗原 50 mg/ml,對 DC 進 行抗原負載；注：若不對 DC 進行抗原負載，該步省略。
4.4 在培養的第 6d,加入重組人 TNF-α（500U/ml），誘導 DC 細胞成熟。
4.5在培養的第 7d 或第 8d,收獲 DC 細胞，其數量應達到 1×106 個以上。
4.6DC 的質檢：
4.6.1 臺盼藍染色檢測細胞活力：活細胞應在 80% 以上；
4.6.2 流式細胞儀檢測 DC 細胞表面 HLA-DR、CD83 和 CD86 等分子的表達，以 確定 DC 是否成熟。
5. DC-CIK 細胞的制備和質檢
5.1 收集步驟 4 和步驟 3 中所獲得的 DC 細胞和 CIK 細胞，按 1∶10 （數目比） 的比例共培養，無血清培養液中添加重組人 IL-2 （300 U/ml）。
5.2每 3 天半量換液一次，并補加重組人 IL-2 （300U/ml）。
5.3 在第 7d 收集細胞，細胞數量應達到 1×1010 個以上。
5.4 DC-CIK 細胞的質檢：
5.4.1 臺盼藍染色檢測：活細胞應在 80% 以上；
5.4.2 流式細胞儀檢測細胞表面 CD3、CD8、CD56 等分子的表達：CD3+CD56+細 胞的比例應在 20% 以上。
5.4.3 細胞殺傷實驗：以 DC-CIK 細胞為效應細胞，以腫瘤細胞 （可為原代腫瘤細 胞或腫瘤細胞株） 為靶細胞，將效應細胞與靶細胞按 10 : 1（數目比） 的比例加 入 96 孔 U 型板中，每孔含靶細胞 1 x 104 個，終體積為 200 ml，設 3 個復 孔。培養 4 h，然后取培養上清，用乳酸脫氫酶 （LDH） 試劑盒檢測效應細胞 對靶細胞的殺傷率。
5.4.4 收獲細胞前，取少量培養物進行細菌、真菌培養，并檢測支原體、衣原體， 及內毒素 （標準：病原學檢測陰性，內毒素<5 Eu）。