色譜峰前延分叉的原因

　　1 色譜柱污染

　　在開始時沒問題，在使用一段時間后出現這個問題，可能是由于污染引起的。這時需要對色譜柱加強沖洗，即使用比方法流動相更強的溶劑沖洗色譜柱。圖1中使用純乙腈沖洗色譜柱消除了3號峰分叉問題。

圖1

　　2 保護柱失效

　　如果樣品基質比較臟，使用一段時間之后，發現的峰分叉或拖尾等問題，很有可能是保護柱失效造成的。一般粗略判斷標準，塔板數、壓力或分離度的改變超過 10%，就需要更換保護柱了。保護柱是消耗品，建議直接更換，不需要再生。

　　3 接頭連接不正確

　　如果色譜柱在使用過程中發現每個峰的峰形都出現問題，先考察是否有連接問題。

　　管線可能太長或太短——這種情況可能導致滲漏或峰分叉/拖尾，如圖2所示。如果管線太長，密封圈位置不當，將發生滲漏。如果管線推出的距離不夠，將會產生一段死空間，形成混合腔，導致柱外體積，使峰形變壞。如果您使用的是不同廠商的色譜柱，一定要確保使用正確的接頭，并保證色譜柱末端接頭位置正確。

圖2

　　安捷倫推薦帶前后墊圈的 Swagelok 型接頭，能讓安捷倫液相色譜系統獲得最佳性能。在所有儀器連接處都可以使用這種接頭，包括閥、加熱器、連接色譜柱等。進行良好連接的步驟如圖3：

圖3

　　4 溶劑效應

　　在反相 LC 中， 如使用 100% 有機溶劑或 100% 強溶劑（圖4中為乙腈），大體積進樣時，將使色譜峰過早洗脫出色譜柱，導致峰變形。如需解決這個問題可以對分析物進行蒸發濃縮，從而減少進樣體積。或者進樣溶劑改為用水稀釋，與流動相更為兼容，即使進樣體積較大也不會出現峰變形。較早流出的峰或靠近溶劑前沿的峰更容易出現拖尾。在液相色譜中用溶于流動相的小體積進樣最為理想。

圖4

　　5 樣品過載

　　當進樣量超過柱子的容量，樣品峰會呈現分叉或拖尾，解決方案就是減少進樣量。這種問題一般在使用小體積色譜柱是表現更為明顯，所以色譜柱方法從常規250mm或150mm長色譜柱轉化到體積較小的快速分析柱時，進樣量要按照柱體積的減小的比例而減小。

　　6 色譜柱塌陷

　　由于柱塌陷引起的峰分叉，很難修復。如果流動相pH>7或在色譜柱pH耐受范圍臨界點附近長時間使用，是比較容易造成硅膠填料溶解塌陷。如果出現色譜柱塌陷，您會看到色譜圖中的每個峰峰形都會發生變化（峰拖尾、加寬或分叉）如圖5，短時間內可以反方向運行，建議直接更換色譜柱。日常使用的過程中注意將溫度降低到 40 ℃以下，特別是使用高 pH 流動相時；使用高溫兼容色譜柱，如立體保護的硅膠柱、混合型柱、聚合物柱、氧化鋯柱等。使用特別適合在較高 pH 下操作的高覆蓋率或雙交聯固定相（比如，ZORBAX Extend-C18），或使用聚合物、混合型或氧化鋯反相柱。

（a）正常；（b）（c）柱塌陷

　　7 柱前篩板部分堵塞

　　長期分析臟樣品，如果沒有保護柱或在線柱前過濾器，顆粒物和強吸附物很可能在柱入口篩板發生堵塞，同時伴隨著壓力升高，解決辦法一般是色譜柱反沖。1.8um粒徑的色譜柱盡量避免反沖。由于現在使用的是高效裝柱工藝，不建議更換色譜柱入口篩板，在許多色譜柱上也不可能更換。如果更換篩板，可能影響柱效。所以最好在色譜柱前安裝在線過濾器（部件號5067-4638）和保護柱。

　　8 色譜柱性能下降

　　在您使用色譜柱時，會用其分析各種目標物、使用各種流動相并分離不同的樣品基質，經過長時間的使用，色譜柱會受到這些物質的影響發生一些微妙的變化，從而引起峰分叉、拖尾或保留時間的改變。在使用新色譜柱時保留其測試樣品色譜圖非常重要，在使用一段時間后進行比較，就能發現性能上的變化。如果分離度下降導致不能進行良好定量，這根色譜柱就應該丟棄并更換了。