血漿蛋白由數百種具有廣泛生理功能的蛋白質組成,其中白蛋白與免疫球蛋白占據著血液制品中主要的市場份額。血漿成分十分復雜,目前工業上血漿蛋白的分離方法主要采用有機溶劑沉淀法、鹽析法和柱層析,但這些方法尚存在著分離環境要求低溫、分離純化步驟繁瑣、純度和收率低等缺點。本論文開展了親水性有機溶劑鹽析萃取偶合柱層析分離純化血漿蛋白的研究,以期為血漿蛋白的分離純化提供新方法。 (1)首先考察了免疫球蛋白G (IgG)在親水性有機溶劑鹽析萃取中的分配規律,選取磷酸氫二鉀、碳酸鈉、檸檬酸鈉三種鹽分別與乙醇組成鹽析萃取體系,考察了不同鹽、醇含量對IgG在體系中分配的影響。結果表明,20%磷酸氫二鉀(w/w)-14%乙醇(w/w)、19%碳酸鈉(w/w)-13%乙醇(w/w)、25%檸檬酸鈉(w/w)-19%乙醇(w/w)為三種鹽析萃取體系的最佳組成,在這些條件下,IgG回收率分別為97.4%、93.1%、90.2%。采用ELISA法檢測了磷酸氫二鉀-乙醇、碳酸鈉-乙醇兩種體系萃取后IgG的活性,發現經磷酸氫二鉀體系萃取后,IgG活性基本維持不變,而經碳酸鈉體系萃取后,IgG活性損失率達70%以上。 (2)將20%磷酸氫二鉀(w/w)-14%乙醇(w/w)鹽析萃取體系調節pH至7.0后,直接從豬血漿中萃取IgG與白蛋白,鹽析萃取能明顯去除部分雜質蛋白,葡萄糖的去除率達51.82%。根據上相中富含鹽的特點,選取疏水層析作為后續純化手段,可得到較高純度的白蛋白與IgG混合物,該混合物再經過陰離子交換層析后,可得到高純度白蛋白和IgG,白蛋白和IgG樣品經非還原SDS-PAGE分析均顯現單一條帶,光密度掃描顯示純度大于99%。 上述結果表明,親水性有機溶劑鹽析萃取偶聯柱層析技術能夠實現血漿蛋白的高效分離。和傳統的鹽析、冷乙醇法和柱層析法相比,具有操作條件溫和,分相時間短,操作簡便,易于放大,目標蛋白純度高等優點,具有工業化應用的前景。