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  • 發布時間:2020-06-16 10:20 原文鏈接: DNA合成儀合成原理介紹

    DNA合成儀合成原理:

    DNA的固相合成:即DNA3'端固定于基質上,然后沿3'向5'方向依次添加核苷酸直至合成所需的DNA片段。不同于應用DNA聚合酶的DNA合成。

    合成過程:

    第一個堿基的3‘末端固定在樹脂上,下一個堿基的5’-OH用二對甲氧三苯甲基DMT保護,堿基上的氨基用苯甲酸保護,然后對3‘-OH用氨基磷酸化合物進行活化。

    1.1個堿基的5’-OH和下個堿基的3‘-OH形成亞磷酸三酯

    2.然后用碘氧化成磷酸三酯

    3.加入二氯乙酸除去第二個堿基5’-OH上的保護劑DMT

    循環進行加入下一個堿基合成完畢后

    1.用苯硫酚除去5’-OH上的保護劑DMT

    2.用濃氫氧化銨將片段與固體樹脂斷開,洗脫

    3.用濃氫氧化銨在加熱的條件下除去堿基上的保護劑

    4.除去氫氧化銨,真空抽干

    5.液相色譜或者PAGE,回收片段最長的。


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