ELISPOT全名為酶聯免疫斑點檢測,英文:Enzyme-linked Immunospot Assay。它結合了細胞培養技術與酶聯免疫吸附技術(即ELISA技術),能夠在單細胞水平檢測細胞因子的分泌情況。其技術原理,一句話概括就是:用抗體捕獲培養中的細胞分泌的細胞因子,并以酶聯斑點顯色的方式將其表現出來。
將細胞因子特異性單克隆抗體包被于乙醇處理過的PVDF膜板上。具體板子處理和包被方法請參考: | ||
將細胞加入到酶標孔中,不同組加不同的刺激劑或者不加刺激劑。 具體細胞處理方法請參考: | ||
細胞分泌的細胞因子與包被抗體結合。 | ||
將多余細胞除去并洗板后,將生物素標記的檢測抗體加入到酶標孔中。 | ||
加入連霉親和素標記的酶偶聯物 | ||
使用酶聯免疫斑點讀板儀讀取斑點并分析。 |