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  • 發布時間:2020-06-16 12:07 原文鏈接: ELISpot實驗操作流程

    ELISPOT全名為酶聯免疫斑點檢測,英文:Enzyme-linked Immunospot Assay。它結合了細胞培養技術與酶聯免疫吸附技術(即ELISA技術),能夠在單細胞水平檢測細胞因子的分泌情況。其技術原理,一句話概括就是:用抗體捕獲培養中的細胞分泌的細胞因子,并以酶聯斑點顯色的方式將其表現出來。


    將細胞因子特異性單克隆抗體包被于乙醇處理過的PVDF膜板上。具體板子處理和包被方法請參考:
    https://www.mabtech.com/knowledge-center/tutorials-and-guidelines/plate-coating-guide


    將細胞加入到酶標孔中,不同組加不同的刺激劑或者不加刺激劑。 具體細胞處理方法請參考:
    https://www.mabtech.com/knowledge-center/tutorials-and-guidelines/cell-handling


    細胞分泌的細胞因子與包被抗體結合。


    將多余細胞除去并洗板后,將生物素標記的檢測抗體加入到酶標孔中。


    加入連霉親和素標記的酶偶聯物


    加入底物
    https://www.mabtech.com/knowledge-center/tutorials-and-guidelines/enzymes-substrates/enzyme-conjugates


    使用酶聯免疫斑點讀板儀讀取斑點并分析。



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