1、事前準備
PBS-EDTA：磷酸鹽緩沖液（PBS），pH 7.2，含2 mM EDTA。
▲ 注意： EDTA可以用其他補充劑代替，例如抗凝檸檬酸右旋糖配方A（ACD-A）或檸檬酸磷酸右旋糖（CPD）。
2、使用FicollPaque?分離人PBMC
▲注意：外周血或血沉棕黃層不應超過8小時，并應補充抗凝劑（例如肝素，EDTA，檸檬酸鹽，ACD-A或檸檬酸鹽磷酸右旋糖（CPD））。
（1）用PBS-EDTA緩沖液體積的2-4倍稀釋細胞。
▲ 注意： 血液樣本越稀釋，單核細胞的純度越好。
（2）在50 mL錐形管中的15 mL Ficoll-Paque?上小心地鋪上35 mL稀釋的細胞懸液。
（3）在不帶制動器的擺桶式轉子中，在20°C下以400×g離心30–40分鐘。
（4）吸出上層，使單核細胞層（淋巴細胞，單核細胞和血小板細胞）在相間不受干擾。
（5）小心地將單核細胞層轉移到新的50 mL錐形管中。
（6）用PBS-EDTA填充錐形管，混合并在20°C下以300×g離心10分鐘。小心地徹底去除上清液。
（7）為了除去血小板，將細胞沉淀重懸于50 mL PBS-EDTA中，并在20°C下以200×g離心10–15分鐘。小心地徹底去除上清液。
▲ 注意： 此步驟將在隨后的MACS?細胞分離中提高目標細胞的純度。
（8）重復步驟7。大多數血小板在200×g離心后仍保留在上清液中。
在適當量的PBS-EDTA中重懸細胞沉淀，然后進行“人Pan T細胞的分離”。
▲ 注意： PBMC可能會在冰箱中用含有0.5％BSA或自體血清的PBS儲存過夜。
（9）箱中存放超過一天的細胞。進行磁性標記之前，請至少清洗一次，然后將細胞重懸在適當的緩沖液中。