三、材料
（一）儀器與器皿
PRC 擴增儀（PE2400），瓊脂糖凝膠電泳設備，微量取樣器，一次性指形管，凝膠成像儀,玻片
（二）試劑與材料
1．瓊脂糖凝膠電泳試劑
1）電泳緩沖液：Tris—乙酸0.04mol/L PH8.0 0.002mol/L EDTA
2）加樣緩沖液：0.25%溴酚蘭40% w/v蔗糖
3）溴化乙錠溶液：0.05mg/ml溴化乙錠/水
4）瓊脂糖
2．TaqDNA 多聚酶
3．5′反應緩沖液：125mmol/L Tris-HCl pH8.2；10mmol/L MgCl2；0.5mg/mlgelatin；125mmol/L(NH4)2SO4； Formamide 25%
4．混合dNTP 液(dATP dGTP dTTP dCTP各2mmol/L)
5．DNA 模板（每2′ ml 中含有10fg 待擴增DNA）
6．引物 1 （25pmol/L），5’加入EcoRI 粘性末端堿基
7. 引物 2 （25pmol/L），5’加入HindIII 粘性末端堿基
8. 無菌水
四．實驗步驟
1.按順序在200ml 指形管中加入以下試劑與樣品：（因購入的試劑批次不同，加樣時有
所差別，以預實驗結果為準。）
1） ddH2O 74ml
2） 10′Buffer 10ml
3） MgCl2 6ml（10′Buffer 如已加入MgCl2，則不必加）
4） dNTP 2ml
5） 引物1 2ml
6） 引物2 2ml
7） 模板 2ml
8） TaqDNA聚合酶2ml
總體積共100ml（也可以配成40ml 的反應體系）
2. 在PCR 擴增儀上按以下反應條件編入程序：（以下為參考值，因擴增的DNA片段不同，各類PCR擴增儀程序設定各不相同，編程過程視擴增的DNA 片段的要求及儀器而定參數，見示范。）
1．預變性 94℃ 2 分種
2．循環條件（30 次）
變性 94℃ 40 秒
復性 55℃ 35 秒
延伸 72℃ 2 分10 秒
3．延長延伸 72℃ 7 分鐘編完反應程序，置反應管于PCR擴增儀的反應孔中，開動機器，擴增循環反應開始。
4. PCR 擴增完畢，配2%瓊脂糖凝膠，取15ml 反應液及相適應的PCR mark 分別點樣，加樣緩沖液應為40%W/V 蔗糖，電泳觀察結果。
5. 凝膠成像儀或紫外燈下觀察實驗結果，是否已擴增到實驗設計的 DNA 片段