隨著蛋白質組學的迅猛發展,重組蛋白質的使用在近年來大大增加。重組雜合體含有一個親和標簽如GST、Myc、His等,可用于輔助目標蛋白的純化,這已經被廣泛使用。利用融合蛋白有助于重組蛋白純化和檢測的這個有點被廣泛認可。Myc標簽相當于人的c-Myc 410-419位肽段(序列為:EQKLISEEDL)。Myc標簽可放在C端或N端,但Myc重組蛋白的低pH洗脫條件往往會降低蛋白質的活力,因此 Myc標簽系統廣泛應用于檢測但很少用于純化。Myc標簽已成功應用于WB雜交技術、免疫沉淀IP和流式細胞術中。因此可用于檢測重組蛋白在細菌、酵母、昆蟲細胞和哺乳細胞中的表達情況。
如何選擇合適的Myc標簽抗體?
我們在選擇一個標簽抗體時,主要根據自己實驗應用上的需要。這里需要考慮的因素包括,Myc抗體的應用檢測類型、Myc抗體的克隆性及制備來源等。比如 該Myc抗體是否能用于免疫熒光IF的檢測?是否可以用于Western Bloting和免疫沉淀IP實驗?是否需要特異性更好的單克隆Myc標簽抗體?
一般來說,應用類型越多,在使用過程中的選擇余地就越大,而小鼠源的單克隆抗體一般在特異性、穩定性以及效價都要優于多克隆抗體,而多克隆抗體則具有親和性更高的優勢。另外,抗體的效價也是考察該抗體性價比的重要方面,也即相當于實際應用時的稀釋比率。一個效價高的100μl Myc抗體(假如其WB檢測的稀釋比率是1:5,000,最終使用液相當于500ml),要比效價低的1ml的Myc抗體(假如WB檢測的稀釋比率是 1:200,最終使用液相當于2ml)性價比更高。因此在選擇抗體的時候,不但需要考慮抗體的量,還需要考慮抗體的效價,即不同應用的建議稀釋比率。
為什么選擇Abbkine的Myc標簽抗體?
目前市面上能提供的Myc抗體有國產分裝或原產的;也有原裝進口,諸如Abcam、CST、Sigma、Novus、Millipore等。國產分裝的Myc抗體在質量穩定性上有不足,并且經過分裝以后,其效價也有損失。而原產于國內實驗室的Myc抗體有些具有較好的檢測活性,但是在應用類型上有差距,并且在批次之間的穩定性上較難控制,而國內僅有的少量原產抗體也是多克隆抗體。 進口品牌里,我們選擇了如下的產品進行了價格、應用類型方面的比較:
因此,我們特別向您推薦美國Abbkine的Myc標簽抗體
Anti-Myc Tag Monoclonal Antibody
(2D5)(貨號為A02060)。該Myc抗體為單克隆抗體,克隆號為2D5。其抗原為KLP偶聯的c-Myc
410-419位肽段(序列為:EQKLISEEDL),即Myc標簽蛋白作為免疫原。該Myc單克隆抗體的效價非常高,WB實驗推薦稀釋比率為
1:1000-1:10000,甚至有客戶報告更高的稀釋比率。在免疫熒光IF、免疫沉淀IP實驗里的表現也很優異。另外,Abbkine還同時提供經HRP偶聯的Myc標簽抗體,尤其適合IP-WB驗證時去除二抗的干擾;兔源多克隆Myc抗體也為客戶提供另一種Myc標簽的檢測方案。