目的：建立黃曲霉毒素M1檢測標準操作程序，并按規程進行檢測，保證檢測操作規范化。
范圍：適用于所有用黃曲霉毒素測定的供試品。
責任：檢驗員、實驗室負責人、實驗室經理對本規程負責。
正文：
HPLC條件：
色譜柱 | 黃曲霉毒素專用C18柱，150*4.6mm，5um |
流動相 | 乙腈－水（25：75） |
熒光檢測器： | 激發波長365nm，發射波長435nm； |
流速 | 1.0ml/min |
進樣量 | 20ul |
樣品取樣:真菌毒素分析的最大誤差來源是樣品的收集和取樣過程，所以必需保證樣品收集和取樣具有代表性。
樣品前處理：不同樣品前處理有些不太相同，具體如下：
① 牛奶：水浴加熱至40 oC；7000r離心15min，用上清液過柱凈化；
② 乳粉和粉狀嬰幼兒配方食品：稱取適量奶粉樣品，用蒸餾水將其溶解，混合均勻使其充分溶解后，7000r離心15min，用上清液過柱凈化；
③ 發酵乳(包括固體狀、半固體狀和帶果肉型)：稱取適量奶粉樣品，溶于蒸餾水中，混合均勻使其充分溶解，調節 PH值至微堿性，高速均質器勻漿，水浴加熱后，離心，取上清液過柱凈化；
④ 干酪：稱取適量切細或粉碎，過篩后加純水溶解，高速均質器勻漿，超聲提取后收集上清液，然后用石油醚進行兩次萃取，然后用適宜的有機溶液萃取，取若干上清液過柱凈化；
⑤ 奶粉：用蒸餾水溶解，混合均勻使其充分溶解，調節PH值至微堿性，水浴加熱后，離心，取上清液過柱凈化；
⑥ 奶油：稱取適量加甲醇水溶解，震蕩后使用分液漏斗取下層溶液，蒸干后復溶于水，用于過柱凈化。
免疫柱凈化步驟：
┅┅取出免疫親和層析柱, 恢復至室溫，將上方塞子取出斜剪斷，再插回親和柱上。
┅┅將免疫親和柱連接于玻璃注射器下。準確移取清澈液注入玻璃注射器；
┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調節壓力使溶液以約1-2mL/min流速緩慢通過免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過柱體；
┅┅更換玻璃注射器與親和柱連接，在注射器中加入10ml水，調節壓力使水以約6mL/min流速清洗親和柱。
┅┅準確加入4mL色譜級乙腈洗脫，流速為1 mL/min ~2mL/min，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測。
注：洗脫后的待測樣品最好用和緩的氮氣在30 ℃下將洗脫液蒸發至體積為50～500 μL；收集管中的洗脫液即為純化后的樣品，可直接用ELISA,熒光和高效液相等方法檢測。
HPLC 檢測需要儀器與耗材
產品名稱 | 說明 | 規格 |
FERMENTEK 黃曲霉素M1固體和液體標準品 | 0.1mg/1mg 0.5ug/ml, 溶于乙腈 | |
LabQuick黃曲霉素M1免疫親和柱 | 用于 樣品前處理柱 分析黃曲霉素 | 25支/盒 |
LabQuick 泵流操作架（6位） | 用于免疫親和柱樣品處理 | |
WhatMan黃曲霉毒素檢測專用玻璃纖維濾紙 | 進口專用，用于過濾大分子干擾物質。 | 110，1.5um（100P） |
氮吹儀 | 氮氣吹干，用于樣品濃縮 | 國產 |
不銹鋼均質器 | 0-22000r/min | 進口 |
技術咨詢請聯系北京安美生醫藥科技有限公司技術部。
/TR>
WhatMan黃曲霉毒素檢測專用玻璃纖維濾紙
進口專用，用于過濾大分子干擾物質。
110，1.5um（100P）
氮吹儀
氮氣吹干，用于樣品濃縮
國產
不銹鋼均質器
0-22000r/min
進口
黃曲霉毒素M1檢測標準操作程序 | ||
文件類別：技術標準 | 編制依據： GB 5413.37—2010 | |
新訂：√ 修訂：□ | 制 定 者： 年悅 | 日 期：2011年12月26日 |
頒發部門：企管部 | 審 定 者：王韓元 | 日 期：2011年12月28日 |
分發部門：檢測實驗室、銷售部、市場部 | 批 準 者： 唐峰 | 日 期：2011年12月30日 |
印制份數： 份 | 分發份數： 份 | 生效日期：2012年1月1日 |