完成一次常規流式實驗,至少要保證單個樣品1×106個細胞的上樣量(100μl)。這還不包括梯度樣品、平行對照、重復實驗,等等。難道需要開個細胞工坊整天生產細胞嗎?不,在實驗儀器日益精密化、小型化,實驗方法日益自動化、人性化的今天,一滴血(等同于10μl血液的細胞量)做流式已經不再是夢想,1,000,000個細胞至少可以完成10個實驗!
一滴血做流式不再是夢想,致力于開發細胞分析領域前沿技術的默克密理博已成功突破這一瓶頸!2011年Journal
of Immunological Methods刊登了University of Houston & University Of
Texas Health Science Centre最新研究成果:采用CD115 marker鑒定10μl小鼠血樣中的單核細胞。文中對比了默克密理博guava微流式細胞分析平臺的效能,最終得出結論10μl 樣本量為該平臺分析單核細胞亞型的下限。
“一滴血做流式”的方法如下:
靜脈采血,肝素或EDTA抗凝;
2. 在試管中加入10μl CD8-FITC/CD4-PE/CD3-PECY5 抗體;
3. 向試管內加入10μl 抗凝全血(約1×105細胞)混勻試劑和全血;
4. 室溫(18-25℃)避光孵育20min;
5. 加入180μl 1X 紅細胞裂解液;
6. 室溫(18-25℃)避光孵育15min;
7. 使用微流式細胞分析儀獲取結果。
結果可見:通過CD3,CD4,CD8的檢測指標對全血樣本中T淋巴細胞進行正確區分,并同時報告Th細胞和Tc細胞的絕對計數結果。證明10μl
的樣本借助“guava微流式”技術同樣能夠完成流式檢測,并且所獲得的數據具有統計學意義,準確區分了T淋巴細胞各個亞群。
參考文獻:
Breslin.,
W.L., et al., Mouse blood monocytes: Standardizing their identification
and analysis using CD115. Journal of Immunological Methods, 2011.
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