2. 克隆形成實驗
細胞的克隆形成實驗被廣泛應用于癌癥的臨床和機理研究中，人們以此來評價細胞群體在體外的功能狀況。其中一些重要的研究領域就包括了細胞毒性評估、細胞轉化研究以及預測腫瘤細胞對各種化學治療試劑的反應。過去，克隆計數實驗是在半固體的瓊脂糖雙層系統上進行的，需要在顯微鏡下一個一個地數，非常費時費力，并且無可避免的引入了人為的主觀因素的影響。一般的高內涵圖像分析系統，由于景深有限，不能準確分辨大體積的克隆；而且它的成像面積較小，又不能對全孔進行克隆計數。
Acumen eX3 能夠自動地對24 或96 孔板進行高內涵的全孔掃描，軟件獨有的體積算法能精確測量克隆大小。細胞經過calcein-AM 染色后，可在選定的時間點來監測克隆的生長，精確區分孔內含有指定細胞數量的克隆，這能幫助用戶區分細胞簇和克隆，從而精確計數。一般來說，細胞克隆被認為含有20 個以上的細胞（圖2，紅色），而細胞簇不足20 個細胞（圖2，綠色）。傳統的格子計數法對于某些克隆來說就會顯得無計可施（如圖2中的克隆2）。而Acumen eX3 鑒定了孔中的所有熒光目標，這也意味著所有克隆都能被準確地鑒定和分類。在表1中顯示了圖2中標記的3 個克隆的面積和體積測量結果（表1）。通過比較可以發現，使用面積作為測量參數相對于使用體積作為測量參數，低估了克隆的尺寸。例如，克隆2 由于其形狀和在孔中的分布方向所致，使得它的體積/面積比要遠遠大于克隆1 和克隆3。
圖2Acumen eX3 軟件對細胞克隆的鑒定及分類
表1 Acumen eX3 計算的3個克隆的相關參數
顯然Acumen eX3這種利用體積讀數來對細胞克隆形成進行評估的方法，避免了由于細胞毒性等引起細胞在數目和外形上的不同而造成的誤差，無疑提供了一種優異的檢測克隆形成的實驗方法6。
3. 血管生成實驗
血管生成（angiogenesis）是癌癥轉移所必需的條件，腫瘤的血管生成是指血管網絡的增殖，這些血管滲透到癌細胞周圍，為之提供營養和氧氣，并帶走廢物。腫瘤的血管生成實際受所釋放的生長因子的調控。這些信號激活了宿主組織中的某些基因，翻譯生成的蛋白會促進新血管的生長。因而科學家一直寄希望于能夠通過干擾腫瘤的血管生成來治療癌癥。
Acumen eX3的大視野能力支持24或96多種規格的微孔板。在生長因子刺激后，細胞用calcein-AM 染色，通過Acumen eX3掃描后，血管生成的數量就可輕松確定8。軟件會得到總的血管面積；也可以將圖像輸出，由Image Pro Plus進行血管長度以及分支數量的測定。
4. 細胞遷移實驗
細胞遷移是高度整合、復雜調控的過程，細胞遷移的調控異常涉及到癌癥、黃斑退化和糖尿病、傷口愈合等多種疾病。腫瘤細胞的侵襲和轉移能力是惡性腫瘤的基本生物學特征，因此腫瘤細胞遷移的研究對癌癥的防止有著重要的意義。近年來，關于評估細胞遷移的實驗方法越來越精細，取代了之前Boyden 小室方法。
Acumen eX3結合Oris?細胞遷移分析（http://www.platypustech.com）的專利技術實現了在在微孔板上進行細胞遷移實驗，利用獨特的細胞接種塞來產生一個能觀察細胞遷移和侵襲的檢測區域。硅膠塞插入96 孔板的每個孔中，接種后4-18 個小時，貼壁細胞附著在硅膠塞以外的區域，形成一個環。去除硅膠塞后，孔中心形成直徑2 mm的圓形區域沒有附著任何細胞，區域外的細胞會向內遷移，此區域即可用于檢測細胞遷移的速率。
圖5 Oris?細胞遷移板在Acumen eX3 上進行的分析，并支持多種熒光標記。
由于Acumen eX3在成像面積和計數效率方面的優勢，大大提高了整個實驗的效率，96孔板掃描分析不超過10分鐘。更重要的是避免了傳統的劃痕法引入的人為操作誤差9-10。
參考文獻
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