用UPLC/MS/MS和UPLC/PDA 進行三聚氰胺、三聚氰酸二酰胺和三聚氰酸分析
Mark E. Benvenuti 和 Aisling O’Connor
沃特世公司，美國馬薩諸塞州米爾福德
引言
北美地區最近出現的寵物食品污染事件突出了對寵物食品、動物飼料以及組織樣品中的三聚氰胺及其代謝物（三聚氰酸二酰胺、三聚氰酸一酰胺和三聚氰酸）進行快速、確定性分析的必要性。如 2007 年 5 月 7 日 的《華盛頓郵報》所述，在美國，未知數量的貓狗因食用了某些品牌的寵物食品而患病或死亡。這導致了數百萬磅寵物食品的召回。在食用了受污染寵物食品的動物腎臟內，發現三聚氰胺 - 三聚氰酸的結晶體迅速形成；這很可能是動物患病甚至死亡的原因。最近，公眾強烈要求制造商和政府監管機構采用更準確、快速的分析方法進行食品安全性檢測；而此次疾病的突發使這一呼聲更加高漲。
在證實了此次污染的廣泛性之后，美國食品藥品管理局（ FDA ）報告稱美國的三聚氰胺存在于面筋和稻米蛋白濃縮物中；這些產品均從中國進口，作為寵物食品使用 1 。動物飼料中也受到了三聚氰胺的污染 2 ，這引起了關于受污染產品可能轉移至人類食品供應的擔憂。
本文介紹兩種方法：第一種方法是用于分析高濃度目標物質的沃特世 ? ACQUITY ? 超高效液相色譜（ UPLC ? ）光電二極管陣列法（ PDA ）；第二種方法是用于分析 ppb 級濃度的 ACQUITY UPLC ? /MS/MS 法。撰寫本文時，其中的一種目標物質“三聚氰酸一酰胺”在市面上買不到；因此，未用上述方法對其進行分析。目前認為該化合物與毒性效應無關，因此對分析過程不重要。兩種方法均可用不到兩分鐘的時間給出結果。
結果和討論
在含水混合液中，三聚氰胺和三聚氰酸可通過氫鍵形成晶格結構。這阻礙了對包含這兩種化合物的樣品進行同步萃取和分析。三聚氰胺不與三聚氰酸二酰胺和三聚氰酸一酰胺反應；因此可在一次檢測中，同時對這些化合物進行萃取和分析。結果表明：試驗部分所述的萃取步驟適用于三聚氰胺和三聚氰酸二酰胺。最近，美國食品藥品管理局公布了使用 SPE 萃取組織樣品中的三聚氰酸的詳細方法 3 。
試驗
萃取寵物食品中的三聚氰胺和三聚氰酸二酰胺的預備程序
稱量 0.10 -1 g 寵物食品
在 5-10 mL 、 2% 的氫氧化銨溶液中進行萃取
用一個 0.45 微米的注射器式濾器進行過濾
將 100 μL 濾液與 900 μL 流動相混合后進樣
三聚氰胺、三聚氰酸二酰胺和三聚氰酸由美國 TCI 公司提供。干狗糧從當地的一家超市中購得。三聚氰酸的標準儲備液通過加水溶解而制得。三聚氰胺和三聚氰酸二酰胺的標準儲備液通過溶解于 0.1% 的氫氧化鈉水溶液而制得。標準儲備液用溶于 90/10 乙腈／水的混合溶劑中 10 mM 醋酸銨進行進一步的稀釋，以配制出所需的濃度水平。