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  • 發布時間:2020-07-13 22:37 原文鏈接: 正常人臍靜脈內皮細胞的培養

    實驗材料:

    1. 嬰兒臍帶;

    2. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素,pH7.2;

    3. 培養用液:M199培養液(含20%小牛血清);0.125%胰蛋白酶-0.01%EDTA(1:1,V:V)混合消化液;D-Hanks液、100IU/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素;

    4. 培養器具:玻璃插管與輸液膠管,培養瓶或皿、白內障、眼科剪、鑷子等;

     

    培養方法:

    1. 在無菌條件下,取健康產婦分娩后新鮮的嬰兒臍帶(長500px以上,不宜超過6h),選擇無夾痕、無扭曲、無凝血阻塞的部分;

    2. 在臍靜脈兩端開口處,分別用絲線扎緊并固定在50ml注射器和帶輸液膠管的玻璃插管上,注入D-Hanks液沖洗臍靜脈,至無血跡;

    3. 用止血鉗夾住玻璃插管上的輸液膠管,從另一端的注射器向臍靜脈徐徐注入0.1%膠原酶溶液,至血管充盈。注意兩端封閉,以防液體返流。立即放入37℃的無菌D-Hanks液內,15min后取出;

    4. 通過注射器吸取收集酶液,同時注入含20%小牛血清的M199培養液沖洗靜脈,合并于同一離心管內,以1000r/min離心7—10min;

    5. 棄去離心沉淀后的上清液。加入20%小牛血清的M199培養液(pH7.2),重新懸浮細胞。并調整至細胞密度為1.5×105—2.0×105個/ml,接種于培養瓶或培養皿中。置37℃,5%CO2培養箱培養;

    6. 第二天棄培養液,用D-Hanks液輕輕洗1次,以去除不貼壁的細胞或死細胞。換入新鮮含20%小牛血清、100IU/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素的M199培養液(pH7.2)。繼續置37℃,5%CO2培養箱培養;

    7. 每2—3d換培養液1次。換液時將原培養液棄掉1/2—2/3,然后加入新鮮的上述培養液至原來的量。待細胞長至融合狀態后,即可行傳代培養;


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