（僅供參考）
凍干菌種 | 號：58003（CS） 參閱附錄1 |
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無細菌百日咳菌懸液 | 含有20% 健康羊血的B-G 斜面，2支 |
| 36℃培養 72hr |
傳代培養 | 活性炭斜面，6個克氏瓶 |
| 36℃培養 48hr |
搖床培養 | 培養基：參閱附錄3 裝有4000ml 滅菌培養基的10L瓶子，6個 1. 比濁 2.鏡檢 3.純菌 |
| 表面通氣36℃培養20-24hr 120-160 rpm |
發酵培養 （300L） | 培養基：同搖床培養 1. 血凝 2.鏡檢 3.純菌 4.比濁 5.pH |
| 表面通氣、攪拌，36℃培養30-36hr，340rpm |
收獲和殺菌 | 上清培養液血凝滴度＞1:16，pH≤8.2 于培養液中加硫汞殺菌（1%→0.01%） |
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鹽析 | 發酵液中加入（NH4）2SO4 ，濃度為30.2%（w/v） |
| 2~8℃靜置，7天 |
離心收集沉淀 | |
| 4000rpm，4~8℃，6×1L，CR-7，4000rpm，30分 離心30min |
浸提 | 用0.05M PB 1M NaCl，0.01%硫柳汞緩沖液（參閱附錄4）浸提抗原 |
| 2~8℃，4~6天，每天振搖2次，1hr/次 |
離心收集上清液 | R9A，4×1L，8000rpm，40分 |
| 8000rpm，4~8℃離心40min |
鹽析 | 上清液中加入（NH4）SO4，濃度為20.2%（g/ml） |
| 2~8℃靜置7天 |
離心收集沉淀 | |
| 11000rpm，4~8℃離心400min R10A3 10000rpm 50分 6×500ml R12A6 12000rpm 35分 4×500ml |
復溶 | |
| 攪拌3小時 |
透析 | 透析液：0.05M PB 1M NaCl 0.01% 硫柳汞收集上清液 納氏試劑比色法：檢測殘余NH4+ |
| 2~8℃ |
離心 | 收集上清液 |
| 4~8℃ 離心5hr 16000rpm ；R13A，12800rpm，5小時30分 或R19A，19000rpm，3小時28分； |
蔗糖密度梯度離心 | 蔗糖濃度（參閱附錄5）：10%和30%，收集蔗糖濃度為5%~12%之間的抗原 |
| RPZ35T轉頭，25,000~30,000rpm，4~8℃ 離心18~20hr |
抗原 | 用Lowrry法測定蛋白氮含量：≥50μgPH/ml |
| 2~8℃保存 |
稀釋至最終蛋白 | 稀釋液：0.05M PB 1M NaCl 0.01% 硫柳汞 |
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解毒 | A：于抗原中加入戊二醛（2.5%→0.05%）溶液，20℃作用4hr B：然后用賴氨酸（參閱附錄6）（10%→0.2%）終止反應，20℃作用2hr |
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透析 | 用0.85% NaCl 0.01%硫柳汞（參閱附錄7），透析直至戊二醛含量＜0.001%（比色法） |
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超聲勻化 | 2~8℃，透析7~14天 |
| 2~8℃保存 |
原液 | 1. 蛋白氮含量測定 2. 鏡檢 3. 無菌試驗 4. 不耐熱毒素試驗 5. 特異性毒性試驗 5.1 小鼠體重減輕試驗：≤10BWDU/ml 5.2 小鼠白細胞毒性增加試驗：≤0.5LPU/ml 5.3 小鼠組胺致敏毒性試驗：≤0.8HUS/ml 6. 毒性逆轉試驗：≤0.8HUS/ml 7. 保護性試驗 8. 熱源試驗 |
| 2~8℃保存 |
DTaP配方 | aP：18μgPH/ml D：25Lf/ml T：7Lf/ml Al（OH）3：1.3mg/ml（參閱附錄8） |
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成品 | 1. 鑒別試驗 2.終容器檢查 3. 化學試驗 4. 無菌試驗 5. 特異性毒性試驗 6. 保護性試驗 7. 毒性逆轉試驗 |
