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  • 發布時間:2020-07-14 10:12 原文鏈接: R&DSystems試劑Q&A常見問題解答(三)

    ELISA

    酶聯吸附免疫法

     

    問:人的Quantikine ELISA試劑盒是否有相關的對照?

    答:R&D Systems為人的Quantikine ELISA試劑盒提供三重對照組。請同我們聯系以便確定產品的目錄號。

    問:我想使用你們目錄中的重組蛋白作為我的ELISA的對照,但我發現質量上有差異。這是為什么?

    答:首先要考慮的是重組蛋白的質量會高出試劑盒的可測試范圍數倍,必須將重組蛋白稀釋多次才能得到試劑盒的測試范圍。一般來說是從mg/毫升稀釋到pg/毫升,在這中間光是移液管的誤差就達到了可測量的水平。

    其次要考慮的是R&D Systems的免疫測試方法測量的蛋白水平是用一種抗體捕獲的、用第二種抗體測定的,這種測定是在試劑盒研發時與標準蛋白校正過的。這些經過測定的早期標準蛋白成為基本校正物,后來的標準都同它校正。這樣不同生產批號的免疫測定試劑盒將是一致的。這些基本校正物蛋白質量的測量方法也許與你的試劑管中蛋白質量的測定方法有所不同。

    問:什么是競爭性ELISA?

    答:競爭ELISA基于競爭結合技術,即樣本中的待測分子與固定量的標記的同樣分子(我們一般用堿性磷酸酶作為標記)同時與固定在孔板上的抗體的同一結合位點進行競爭,參照標準曲線,試驗數據值是定量的。

    問:什么是夾心ELISA

    答:夾層ELISA采用對樣本中分析物的特異的抗體作為固定化的捕獲抗體,然后用第二個帶標記的抗體作檢測,檢測抗體對分析物也是專一的。當參照標準曲線時,試驗數據值是定量的。

    問:什么是直接ELISA

    答:直接ELISA是將被測的分析物直接包膜在微孔板表面,然后用測試抗體來證實被測分析物的存在。當與重組蛋白(標準曲線)進行參照時,試驗數據值是半定量的。

    問:R&D Systems Parameter品牌的ELISA試劑盒可以做多少個樣本?

    答:R&D Systems Parameter品牌的ELISA試劑盒可以做6點的標準曲線、對照和41個樣本(每個樣本做雙份)。

    問:R&D SystemsQuantikine品牌人的ELISA試劑盒可以做多少個樣本?

    答:大多數R&D Systems 的Quantikine品牌人的ELISA試劑盒可以做標準曲線、對照和40個樣本(每個樣本做雙份)。

    問:R&D SystemsQuantikine品牌的小鼠、大鼠和豬的ELISA試劑盒可以做多少個樣本?

    答:Quantikine品牌的小鼠或大鼠的ELISA試劑盒中的每一微孔板可以做標準曲線、對照和39個樣本(每個樣本做雙份)。Quantikine品牌的小鼠或大鼠的ELISA試劑盒中,有些有兩個微孔板,有些只有一個微孔板。

    問:R&D Systems建議用什么樣的ELISA微孔板來做DuoSets和抗體配對實驗?

    答:在R&D Systems本部,我們用Costar的微孔板(目錄#2592)。Costar的電話是(800)492-1110。

    問:R&D Systems用什么純度的BSAELISA

    答:為了ELISA,我們采用Serological Proteins的BSA(目錄#82-045)。Serological Proteins的電話是(815)937-8270。

    問:Quantikine ELISA試劑盒里都包括什么?

    答:R&D Systems的Quantikine ELISA試劑盒是一個完整的試劑盒。它包含了一個已包板的微孔板、酶標抗體、標準蛋白、稀釋劑、底物、終止劑、洗液和微孔板密封膜。所有試劑盒對實驗說明書中所列樣本都經充分驗證,確保高質量。

    問:什么是DuoSet

    答:DuoSet ELISA開發系統提供了足夠的捕獲抗體、測試抗體、標準蛋白和Streptavidin-HRP,可以做大約十五個96孔微孔板的實驗。我們還提供了樣本試驗流程和與這一系統配套的試劑。DuoSet ELISA開發系統主要是為高通量篩選細胞培養的上清液所設計,但熟悉ELISA研發的實驗人員已成功將其推廣到血清和血漿樣本的使用。

    問:什么是R&D Systems的抗體配對?

    答:R&D Systems的抗體配對是一個自己動手的產品。R&D Systems建議此產品的使用者在免疫測試的開發方面應很有造詣。使用者必須以經驗為依據來決定捕獲抗體和測試抗體的最佳濃度。R&D Systems的重組細胞因子并未經ELISA校正,所以在使用前必須經ELISA做質量校正。更多有關ELISA開發的信息可參照我們的《ELISA開發指導》 (網站: http://www.rndsystems.com/tsg_detail_objectname_elisa_development.aspx) 。

    問:QuantikineQuantiGlo ELISA試劑盒有何不同?

    答:R&D Systems的Quantikine牌子的ELISA試劑盒是一種比色法檢測,需要一臺標準讀光儀配備有合適的濾光片可用于讀數和光波長校正。QuantiGlo ELISA試劑盒采用了一種熒光底物,計數為光流明或相對光單位(RLU)。因此,QuantiGlo ELISA試劑盒需要有熒光讀光儀。這種熒光讀光儀需設置在:1.0分鐘的滯待時間;1.0秒/孔的讀數時間;累計狀態;自動獲取開啟。R&D Systems使用Dynex Technologies的熒光讀光儀。


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