表 3 四級桿 - 飛行時間質譜儀采集參數
軟件平臺 | Proteome Discoverer |
搜索引擎 | MASCOT v 2.1 |
數據庫 | NCBI, April 2008 |
最大漏切數目 | 1 |
前體離子容忍度 | 離子阱數據 : 1.4 Da |
四級桿飛行時間質譜數據 : 40 ppm | |
碎片容忍度 | 離子阱數據 |
四級桿飛行時間質譜數據 : 100 mmu | |
蛋白質量 | 不限制 |
反庫搜索 | 使用 |
儀器類型 | 離子阱數據 : ESI-TRAP |
四級桿飛行時間質譜數據 : ESI-Q-TOF | |
修飾 | 固定修飾 : 半胱氨酸烷基化 |
得分 | MUDPIT scoring |
蛋白 cut-off: 20 | |
肽 cut-off: 10 | |
DTA 產生條件 | 總離子強度閾值 : 100 |
最小離子數 : 10 | |
信噪比閾值: 2 前體離子范圍 700 -5000 m /z ( 離子阱 ), 700 -7000 m /z ( 四級桿 - 飛行時間質譜 ) |
Table 4: 數據分析數據庫搜索條件
結果與討論
LTQ Velos 比 LTQ XL 和 Q-TOF 鑒定到了更多的特異性肽段
圖 2 : 1ug C.elegans 酶解樣品在 60 分鐘內運行色基峰色譜圖比較(上圖為 LTQ Velos 雙壓離子阱質譜儀,下圖為四級桿飛行時間質譜儀)
與線性離子阱 LTQ XL 和四級桿 - 飛行時間質譜儀 Q-TOF 相比, LTQ Velos 雙壓離子阱質譜儀從 C.elegans
的胰酶酶解物中鑒定得到了更多的特異性肽段。有更多的蛋白被鑒定到。圖 2 顯示的是在 60 分鐘的梯度內用反相色譜 -LTQ Velos
質譜儀得到的基峰色譜圖,以及用 1200 高效液相色譜 - 芯片分離 - 四級桿飛行時間質譜一得到基峰質譜圖。在 60 分鐘的分離過程, LTQ
Velos 質譜儀比 LTQ XL 質譜儀多鑒定了 67% 的特異性肽段,比 Q-TOF 多鑒定了 165.7% 的特異性肽段,上述結果都是在
3Hz 情況下得到的。在相同的實驗過程中, LTQ Velos 離子阱鑒定到蛋白的數目比四級桿 - 飛行時間質譜儀 Q-TOF 多了 240%
。在實驗中,鑒定到的蛋白和特異性肽段的數目都是三次重復實驗取的平均值,而且相對標準偏差小于 10%
。每一次運行樣品,平均百分比都增加了,但并不是所有重復數據都增加了。
圖 3 樣品: 1ug C.elegans 蛋白胰酶酶解物 在反相色譜分離。 LTQ Velos 雙壓離子阱比 LTQ XL 離子阱和四級桿 - 飛行時間質譜儀能鑒定到更多的特異性肽段和蛋白。圖中所示為兩個梯度的結果,也標出了每一個儀器的實際采樣速率。
方法 | Top 6 DDA |
Precursors sorted by abundance 按照豐度排序前體離子 | |
帶電量選擇 | 拒絕單電荷 |
動態排除 | Duration: 30 秒 (60 min), |
60 秒 (180 min) | |
Repeat count: 1 |