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  • 表 3 四級桿 - 飛行時間質譜儀采集參數

    軟件平臺

    Proteome Discoverer

    搜索引擎

    MASCOT v 2.1

    數據庫

    NCBI, April 2008

    最大漏切數目

    1

    前體離子容忍度

    離子阱數據 : 1.4 Da


    四級桿飛行時間質譜數據 : 40 ppm

    碎片容忍度

    離子阱數據


    四級桿飛行時間質譜數據 : 100 mmu



    蛋白質量

    不限制



    反庫搜索

    使用



    儀器類型

    離子阱數據 : ESI-TRAP


    四級桿飛行時間質譜數據 : ESI-Q-TOF

    修飾

    固定修飾 : 半胱氨酸烷基化

    得分

    MUDPIT scoring


    蛋白 cut-off: 20


    肽 cut-off: 10

    DTA 產生條件

    總離子強度閾值 : 100


    最小離子數 : 10


    信噪比閾值: 2 前體離子范圍 700 -5000 m /z ( 離子阱 ), 700 -7000 m /z ( 四級桿 - 飛行時間質譜 )

    Table 4: 數據分析數據庫搜索條件

    結果與討論

    LTQ Velos 比 LTQ XL 和 Q-TOF 鑒定到了更多的特異性肽段

    圖 2 : 1ug C.elegans 酶解樣品在 60 分鐘內運行色基峰色譜圖比較(上圖為 LTQ Velos 雙壓離子阱質譜儀,下圖為四級桿飛行時間質譜儀)

    與線性離子阱 LTQ XL 和四級桿 - 飛行時間質譜儀 Q-TOF 相比, LTQ Velos 雙壓離子阱質譜儀從 C.elegans 的胰酶酶解物中鑒定得到了更多的特異性肽段。有更多的蛋白被鑒定到。圖 2 顯示的是在 60 分鐘的梯度內用反相色譜 -LTQ Velos 質譜儀得到的基峰色譜圖,以及用 1200 高效液相色譜 - 芯片分離 - 四級桿飛行時間質譜一得到基峰質譜圖。在 60 分鐘的分離過程, LTQ Velos 質譜儀比 LTQ XL 質譜儀多鑒定了 67% 的特異性肽段,比 Q-TOF 多鑒定了 165.7% 的特異性肽段,上述結果都是在 3Hz 情況下得到的。在相同的實驗過程中, LTQ Velos 離子阱鑒定到蛋白的數目比四級桿 - 飛行時間質譜儀 Q-TOF 多了 240% 。在實驗中,鑒定到的蛋白和特異性肽段的數目都是三次重復實驗取的平均值,而且相對標準偏差小于 10% 。每一次運行樣品,平均百分比都增加了,但并不是所有重復數據都增加了。

    圖 3 樣品: 1ug C.elegans 蛋白胰酶酶解物 在反相色譜分離。 LTQ Velos 雙壓離子阱比 LTQ XL 離子阱和四級桿 - 飛行時間質譜儀能鑒定到更多的特異性肽段和蛋白。圖中所示為兩個梯度的結果,也標出了每一個儀器的實際采樣速率。

    方法

    Top 6 DDA


    Precursors sorted by abundance 按照豐度排序前體離子

    帶電量選擇

    拒絕單電荷

    動態排除

    Duration: 30 秒 (60 min),


    60 秒 (180 min)


    Repeat count: 1


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