市場監管總局關于發布《食品中5種α-受體阻斷類藥物的測定》食品補充檢驗方法的公告BJS 201808
1 范圍
本方法規定了食品（含保健食品）中酚妥拉明、哌唑嗪、特拉唑嗪、育亨賓、妥拉唑林的高效液相色譜-串聯質譜測定方法。
本方法適用于糖果（硬質糖果、凝膠糖果）、酒、茶飲料等食品及片劑、口服液、膠囊劑等保健食品中酚妥拉明、哌唑嗪、特拉唑嗪、育亨賓、妥拉唑林的測定和確證。其他類似基質可參照本方法檢測。
2 原理
試樣經甲醇超聲提取，過濾后，濾液供高效液相色譜-串聯質譜測定，外標法定量。
3 試劑和材料
除另有規定外，本方法中所用試劑均為分析純，水為符合GB/T 6682規定的一級水。
3.1 試劑
3.1.1乙腈（CH3CN）：色譜純。
3.1.2甲酸（CH2O2）：色譜純。
3.1.3甲醇（CH3OH）：色譜純。
3.1.4 0.1%甲酸水溶液：精密量取甲酸（3.1.2）1 mL，用水稀釋至1000 mL。
3.1.5 0.1%甲酸乙腈溶液：精密量取甲酸（3.1.2）1 mL，用乙腈（3.1.1）稀釋至1000 mL。
3.2 標準品
甲磺酸酚妥拉明、鹽酸哌唑嗪、鹽酸特拉唑嗪、鹽酸育亨賓、鹽酸妥拉唑林標準品的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子質量和折算系數詳見附錄A，甲磺酸酚妥拉明、鹽酸哌唑嗪、鹽酸育亨賓、鹽酸妥拉唑林純度均≥99%，鹽酸特拉唑嗪純度≥92%。
3.3 標準溶液配制
3.3.1標準儲備液（500 μg/mL）：精密稱取標準品（3.2），分別折算成酚妥拉明、哌唑嗪、特拉唑嗪、育亨賓、妥拉唑林（3.2）各10 mg，用甲醇（3.1.3）溶解，并轉移至20 mL容量瓶中，定容至刻度，制成濃度為500 μg/mL的標準儲備液，-18 ℃保存，有效期6個月。
3.3.2標準中間液（10 μg/mL）：準確吸取酚妥拉明、哌唑嗪、特拉唑嗪、育亨賓、妥拉唑林標準儲備液（3.3.1）各1 mL，置于50 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為10 μg/mL的標準中間液，4 ℃避光保存，有效期3個月。
3.3.3混合標準中間液：準確吸取酚妥拉明標準中間液（3.3.2）2 mL、哌唑嗪標準中間液（3.3.2）2 mL、特拉唑嗪標準中間液（3.3.2）1 mL、育亨賓標準標準中間液（3.3.2）1 mL、妥拉唑林標準中間液（3.3.2）8 mL，置于同一100 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成混合標準中間液，臨用新制。其中酚妥拉明、哌唑嗪濃度為200 ng/mL，特拉唑嗪、育亨賓濃度為100 ng/mL，妥拉唑林濃度為800 ng/mL。
3.3.4混合標準工作溶液：分別準確吸取混合標準中間液（3.3.3）0.1 mL、0.2 mL、1.0 mL、2.0 mL、5.0 mL，置于20 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，作為系列混合標準工作溶液S1~S5，酚妥拉明、哌唑嗪濃度均依次為1 ng/mL、2 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL、50 ng/mL，特拉唑嗪、育亨賓濃度均依次為0.5 ng/mL、1 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL、25 ng/mL，妥拉唑林濃度依次為4 ng/mL、8 ng/mL、40 ng/mL、80 ng/mL、200 ng/mL。臨用新制或依儀器響應情況配制適當濃度的混合標準工作溶液。
4 儀器和設備
4.1 高效液相色譜-串聯質譜儀：配有電噴霧離子源。
4.2 分析天平：感量分別為0.00001g和0.0001g。
4.3 超聲波清洗器。
5 分析步驟
5.1 試樣制備
5.1.1固體試樣：取適量混勻，研細，稱取粉末1 g（精確至0. 001 g），置具塞試管中，精密加入甲醇10 mL，密塞，超聲提取30 min，冷卻至室溫，搖勻，過濾膜（0.22 μm，有機相），取濾液，根據實際濃度適當稀釋至線性范圍內，備用。
5.1.2液態試樣：取適量搖勻，稱取液體1 g（精確至0.0001 g）于10 mL容量瓶中，加入甲醇8 mL，超聲提取30 min，冷卻至室溫，用甲醇定容至10mL，過濾膜（0.22 μm，有機相），取濾液，根據實際濃度適當稀釋至線性范圍內，備用。
5.1.3空白試驗：不加試樣按試樣同法處理，制得空白溶液，備用。稱取與試樣等量的空白基質試樣，按試樣同法處理，制得空白基質試樣溶液，備用。
5.2 儀器參考條件
5.2.1色譜條件
a）色譜柱：C18柱（2.1×100 mm，2.6 μm），或性能相當者。
b）流動相：A為0.1%甲酸水溶液（3.1.4），B為0.1%甲酸乙腈溶液（3.1.5），參考梯度洗脫程序見表1。
c）流速：300 μL/min。
d) 柱溫：40 ℃。
e) 進樣量：5 μL。
表1 參考梯度洗脫程序表
梯度時間/min
流動相A（%）
流動相B（%）
0.00
90
10
1.00
90
10
7.00
10
90
11.00
10
90
11.50
90
10
15.00
90
10
注：在有共流出成分影響目標化合物檢測時，可以適當調節流動相比例，使盡可能與干擾成分分離，減少干擾。
5.2.2質譜條件
a）電離方式：電噴霧正離子模式。
b）檢測方式：多反應監測（MRM）。
c）電噴霧電壓：5500 V。
d）離子源溫度：550 ℃。
e）霧化氣壓力：55 psi。
f）氣簾氣壓力：35 psi。
g）輔助氣體壓力：55 psi。
h）定性離子對、定量離子對及其他質譜參數見表2。
表2 5種α-受體阻斷類藥物離子選擇參數表
序號
化合物名稱
母離子 （m/z）
子離子 （m/z）
碰撞能量（eV）
去簇電壓（V）
1
酚妥拉明
282.1
91.0*
41
100
212.0
12
2
哌唑嗪
384.2
247.0*
38
70
366.2
35
3
特拉唑嗪
388.1
247.1*
41
120
290.2
30
4
育亨賓
355.2
144.2*
28
120
212.0
31
5
妥拉唑林
161.2
65.1*
44
120
90.5
40
* 為定量離子；方法提供的監測離子對等測定條件為推薦條件，各實驗室可根據所配置儀器的具體情況作適當調整；在樣品基質有測定干擾的情況下，可選用其他監測離子對。
5.3 定性測定
按照高效液相色譜-串聯質譜條件測定試樣和標準工作溶液，記錄試樣和標準溶液中各化合物的色譜保留時間，試樣中目標化合物色譜峰的保留時間與相應標準色譜峰的保留時間相比較，變化范圍在±2.5%內，并且所選擇的監測離子對的相對豐度比與相當濃度標準溶液的離子相對豐度比的偏差不超過表3規定的范圍，每個定性離子的信噪比應大于等于3，可以確定試樣中檢出相應化合物。
表3 定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差
相對離子豐度（%）
>50
>20~50
>10~20
≤10
允許的相對偏差（%）
±20
±25
±30
±50
5.4 定量測定
5.4.1標準曲線的制作
將混合標準工作溶液（3.3.4）分別按儀器參考條件（5.2）進行測定，得到相應的標準溶液的色譜峰面積。以標準工作溶液的濃度為橫坐標，以色譜峰的峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。必要時可用空白基質試樣溶液（5.1.3）配制基質混合標準工作溶液繪制標準曲線。
標準品多反應監測（MRM）色譜圖參見附錄B。
5.4.2試樣溶液的測定
將試樣溶液（5.1）按儀器參考條件（5.2）進行測定，得到相應的樣品溶液的色譜峰面積。根據標準曲線得到待測液中組分的濃度。
6 結果計算
將液相色譜-質譜測得的濃度代入下式計算含量：
式中：
X — 試樣中各待測物的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；
c — 從標準曲線中讀出的試樣溶液中各待測物的濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）；
V — 樣液最終定容體積，單位為毫升（mL）；
m — 試樣溶液所代表的質量，單位為克（g）；
K — 稀釋倍數；
計算結果以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示，結果保留三位有效數字。
7 精密度
在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的10%。
8 準確度
本方法的添加濃度范圍及回收率實驗數據見表4。
表4 本方法添加濃度范圍及回收率
目標化合物
添加濃度范圍
（mg/kg）
回收率（%）
相對標準偏差（%）
酚妥拉明
0.01~0.1
70~120
≤20
哌唑嗪
0.01~0.1
70~120
≤20
特拉唑嗪
0.005~0.05
70~120
≤20
育亨賓
0.005~0.05
70~120
≤20
妥拉唑林
0.04~0.4
70~120
≤15
9 其它
當取樣量為1.0 g，定容體積為10 mL時，本方法中酚妥拉明與哌唑嗪檢出限均為0.005 mg/kg，定量限為0.01 mg/kg；特拉唑嗪與育亨賓的檢出限均為0.0025 mg/kg，定量限為0.005 mg/kg；妥拉唑林的檢出限為0.02 mg/kg，定量限為0.04 mg/kg。
附錄A
標準品信息
表A 標準品的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子質量和折算系數
序號
中文名稱
英文名稱
CAS登錄號
分子式
相對分子質量
折算系數
1
甲磺酸酚妥拉明
Phentolamine Mesylate
65-28-1
C17H19N3O·CH3SO3H
377.46
0.745
2
鹽酸哌唑嗪
Prazosin Hydrochloride
19237-84-4
C19H21N5O4·HCl
419.86
0.913
3
鹽酸特拉唑嗪
Terazosin Hydrochloride
63074-08-8
C19H25N5O4·HCl
423.89
0.914
4
鹽酸育亨賓
Yohimbine Hydrochloride
65-19-0
C21H26N2O3·HCl
390.91
0.907
5
鹽酸妥拉唑林
Tolazoline
Hydrochloride
59-97-2
C10H12N2·HCl
196.68
0.815
本方法負責起草單位：陜西省食品藥品監督檢驗研究院。
驗證單位：浙江省食品藥品檢驗所、吉林省食品檢驗所、上海市食品藥品檢驗所、江南大學、漢中市食品藥品檢驗檢測中心。
文章鏈接：儀器設備網 https://www.instrumentsinfo.com/technology/show-3687.html