8. TA質粒轉化菌落的驗證
與表達載體的驗證不同，轉化TA質粒時不用雙酶切驗證。只需用目的基因引物和TA載體引物PCR驗證即可。TA載體引物PCR片段比插入片段大約長150bp。
目的基因退火溫度與之前膠回收時溫度相同，TA退火溫度60C即可，但可在55～70之間變動，不會影響結果。
挑取至少6個白色克隆于6個含4ml抗性的LB培養基的滅菌試管中37C過夜搖菌。
取搖約2h時的菌液1ul作為模板，Taq
PCR（30ul）驗證（驗證時條件等應與以前一致）。取菌液時應在超凈臺中進行，以便PCR驗證為陽性后可以直接對相應的菌落進行小量質粒抽提。最好不用菌落直接PCR，避免由于質粒粘附在細菌表面而引起的假陽性。對PCR驗證后陽性的細菌小抽
驗證時所用的control及樣品：
1．白色菌落T載體引物PCR
2．白色菌落目的基因引物PCR
3．藍色菌落T載體引物
4．1中T載體引物PCR、膠回收后，用回收產物做模板，目的基因為引物PCR，進一步驗證
9．小量質粒抽提
采用上海博采生物工程有限公司提供的小量質粒快速抽提試劑盒，操作步驟如下：
1．取菌液1.5ml，高速離心10000g 1min 收集菌體。可以在初次離心后棄上清再加入相同的菌液，增加小抽的細菌數量，提高最終質粒的濃度。
2．棄上清，沉淀中加入100ul S1，振蕩至徹底懸浮。
3．加200ul
S2，立即上下顛倒，使細菌裂解，室溫放置2min至溶液澄清。（使用前先觀察S2中是否有沉淀，室溫低時S2中SDS會沉淀，此時40C水浴使之融解）
4．加400ul S3，立即上下顛倒5－10次，使充分中和，室溫放置2min。
5．15000rpm，10min
6．將上清轉移到2ml樣品收集管和3S柱中，室溫放置2min，10000rpm，1min。轉移上清時切忌吸取蛋白沉淀。
7．取下3S柱，棄廢液，將3S柱置入同一支收集管中，吸取700ul Wash Solution到3S柱，12000rpm，1min。（用Washing
Solution前先確認其是否加了乙醇，不加乙醇的WS會將質粒洗脫）
8．重復step7
9．取下3S柱，棄廢液，10000rpm，1min。
10．將3S柱置于干凈的1.5ml離心管中，在膜中央加30-50ul
TE或水，加蓋50C水浴2min，然后15000rpm，1min。離心后液體-20C保存。
