RbCl制備感受態細胞
需準備的滅菌器具和培養液：
SOB，Buffer 1，Buffer 2，3×200ml廣口瓶，1.5ml
EP管，1×500ml離心瓶（按200ml搖菌量計算），2×50ml離心管，2×移液管（用于加Buffer 1），液氮，冰
離心管，EP管，移液管使用前均需要放在4C預冷。離心機使用前也應預冷
1．將DH5α(上批做好的感受態菌或保種的DH5a)劃在LB平板上，370C培養10-12小時
2．挑單克隆于4ml SOB培養液（SOB培養液中的MgCl2 和MgSO4必須搖菌之前加，細菌活化也可以用LB培養液），370C培養過夜
3．取2ml過夜菌到200ml SOB培養液（1000ml三角椎瓶），370C培養至OD600＝0.35（約1.5小時，OD最好不能超過0.4
4．將菌迅速置于鹽冰浴上15分鐘（鹽使冰浴更冷，也可以不用鹽冰浴），同時預冷500ml離心瓶和離心機
5．將菌分裝于500ml離心瓶中，5000rpm，40C離心5分鐘，棄上清
6．加入64ml Buffer1，小心的吹打細菌使之混勻（最好從瓶壁上離菌落3－4cm處吹下buffer
1，不要直接吹打菌落，冰上操作。加buffer1時先預加30ml，當菌落吹打均勻后再補加34ml
buffer），冰上15min。4800rpm，40C離心5分鐘，棄上清
7．將菌平均分裝于兩個50ml離心管中，分別加入8ml
Buffer2，懸浮細胞，懸浮方法同step6，置冰上。立即分裝為100ul/每管（1.5ml離心管需預冷，無菌操作）
8．分裝好的感受態菌立即放入液氮中，-700C保存
SOB 200ml
Tryptone 4g
Yeast extract 1g
NaCl 0.12g
KCl 0.1g
Autoclave
用前加入 1M MgCl2 到 10mM
1M MgSO4到 10mM (MgCl2，MgSO4混合液過濾除菌)
Buffer1 64ml
RbCl 0.768g
MnCl2*4H2O 0.636g
CaCl2*2H2O 0.096g
Glycerol 9.6g
KAC 1.92ml of 1M stock PH7.5
0.2M Hac 調PH至5.8
0.22um過濾器滅菌,40C保存
Buffer 2 20ml
MOPS 0.4ml of 0.5M stock PH6.8 MOPS不能高壓滅菌
RbCl 0.024g
CaCl2*2H2O 0.22g
Glycerol 3g
0.22um過濾器滅菌,40C保存
22．常用試劑配方：
LB液體培養基
Tryptone 1g
Yeast Extract 0.5g
NaCl 1g
加蒸餾水至總體積為100ml，高壓蒸汽滅菌。