流式細胞儀的發展歷史及其原理與應用進展（三）

20 世紀80 年代中期,國際上提出的白血病MIC分型法,標志著流式細胞儀及免疫分型在白血病診斷中的廣泛應用。我國自80 年代中期引進該儀器,90 年代迅速發展,現在已得到普遍應用。這期間免疫標記方法已發生很大的變化,由開始的主要采用間接免疫熒光標記法到直接免疫熒光標記法,從單色或雙色到利用CD45 抗體標記設門法進行多色免疫標記,使免疫分型的準確性得到很大的提高,現在已成為診斷白血病不可缺少的工具。同時淋巴瘤的免疫分型與白血病免疫分型一樣也已得到廣泛開展。在獲得性免疫缺陷綜合癥和“非典”的研究與治療中FCM也發揮極大的作用。它通過對外周血中的CD4 + T 淋巴細胞進行絕對記數,來反映病情進展及監測療效。

3.2.2 　流式細胞術在腫瘤學上的應用　利用FCM進行細胞周期分析、DNA
倍體分析、定量分析檢測細胞增殖標志物、細胞表面標志、癌基因蛋白產物、耐藥蛋白、細胞凋亡等,從而獲得組織形態學方法難以得到的信息,可為腫瘤的臨床診斷、治療和預防提供幫助。對腫瘤細胞DNA
含量作定量分析,解析細胞周期,通過細胞異倍體測定預測各種腫瘤的預后,并能在化療中對藥物的選擇和放療中強度、時間的決定等起指導作用。解析抗癌藥物作用機制,對癌癥進行早期診斷及鑒別良惡性有一定參考價值。此外,由于FCM對凋亡、周期蛋白、癌基因及抗癌基因的研究也發揮著重要作用,近年來引起腫瘤研究者的極大關注,已廣泛應用于腫瘤基礎和臨床研究中,為腫瘤診斷、療效評價和預后預測提供重要參考指標。另外,傳統的細胞形態學至今仍是診斷腫瘤的一種重要的手段。多年來,細胞學工作者就設想使腫瘤細胞學診斷自動化,流式細胞術的問世,使細胞學檢查自動化的宿愿如愿以償,并已廣泛應用于腫瘤臨床細胞學的診斷研究。
大量的臨床應用表明,流式細胞術對腫瘤細胞學的診斷正確率已達常規細胞學診斷水平。腫瘤細胞對化療藥物的耐受性是腫瘤治療的主要障礙。腫瘤細胞的耐藥性可分為原發耐藥和繼發耐藥,前者在化療前就存在于腫瘤細胞中,與用藥無關,后者是由化療藥物誘導產生的,即在藥物使用前對藥物敏感,而在用藥之后產生耐藥。繼發耐藥根據耐藥譜的不同又可分為原藥耐藥(PDR) 和多藥耐藥(MDR) 。MDR 相關蛋白包括P 糖蛋白、多藥耐藥相關蛋白等。它們都屬于ATP 酶活性轉運蛋白,均是通過藥物外排泵的作用降低細胞中藥物的聚集。因此應用FCM 檢測腫瘤細胞的多藥耐藥相關蛋白的表達水平,對監測臨床腫瘤化療效果及藥物的選擇有一定意義。

3.2.3
　在血液學研究中的應用　除上述FCM在白血病及淋巴瘤的免疫分型應用之外,它在血液學研究中有廣泛的用途。如血小板記數、血小板自身抗體測定、血小板膜表面糖蛋白分析、血小板活化分析等。紅細胞表面相關免疫球蛋白測定、紅細胞血型抗原分析等。

3.3 　流式細胞術新技術的應用
3.3.1
　液相芯片技術　生物芯片技術是近年來隨著人類基因組計劃和蛋白質組計劃的進展在生命科學領域中迅速發展起來的一項新技術,現已被大家所熟知。將生物芯片技術和FCM有機結合在一起,把不同生物探針(核酸、蛋白等)
標記在各種有熒光的微球上,以熒光標記微球作為反應載體在液相系統中完成生物學反應,即為流式細胞術液相芯片技術。它組成由微球體+ 探針+ 目的分子+ 報告分子的一種簡單反應模式。可以在同一液相中同時檢測多個目的分子。如對血液中多種白細胞介素檢測。

3.3.2 　定量流式細胞分析　定量流式細胞分析(quantitative flow cytometry QFCM)
是指用流式細胞術對細胞或微粒上標記熒光分子的定量分析,從而對細胞的生物分子進行精確測量。如每個分子表達的平均分子數、抗原數等。定量流式細胞分析不同于以往的相對熒光強度或陽性細胞百分率測量,它更為準確、靈敏。為FCM的發展趨勢。如在獲得性免疫缺陷綜合癥和“非典”的研究與治療中,對外周血中的CD4 + T 淋巴細胞進行絕對記數,來反映病情進展及監測療效。總之,流式細胞術應用極為廣泛,本文所介紹的也只是其中一部分。隨著當今各項科學技術的迅猛發展,流式細胞術會有更加廣闊的應用前景。

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