高效液相色譜儀與氣相色譜儀的進樣方式、流動相、流動相與樣品的作用、流動相粘度、流動相流動壓力、固定相粒度、柱溫、樣品回收和應用范圍等技術指標的差別如下:
一、進樣方式:
1、高效液相色譜儀:樣品制成溶液。
2、氣相色譜儀:樣品需加熱氣化或裂解且不分解。
二、流動相:
1、高效液相色譜儀:可選用不同性質的各種溶劑。
2、氣相色譜儀:惰性氣體。
三、流動相與樣品的作用:
1、高效液相色譜儀:可發生作用,能改善分離選擇性。
2、氣相色譜儀:不發生作用。
四、流動相粘度:
1、高效液相色譜儀:10ˉ3Pa·S
2、氣相色譜儀:10ˉ5Pa·S
五、流動相流動壓力:
1、高效液相色譜儀:2~20MPa
2、氣相色譜儀:1~0.5MPa
六、固定相粒度:
1、高效液相色譜儀:5~10um
2、氣相色譜儀:0.1超臨界流體色譜儀(SFC)~0.5mm
七、柱溫:
1、高效液相色譜儀:常溫
2、氣相色譜儀:常溫~300℃
八、樣品回收:
1、高效液相色譜儀:容易且可定量,適合大量制備。
2、氣相色譜儀:困難。
九、應用范圍:
1、高效液相色譜儀:沸點高、極性強、穩定性差、分子量大的化合物和離子化合物。
2、氣相色譜儀:穩定性好和易氣化的化合物。
一、溶劑對于待測樣品必須具有合適的極性和良好的選擇性。
二、溶劑要與檢測器匹配:
1、對于紫外吸收檢測器,應選用檢測器波長比溶劑的紫外截止波長長。
溶劑的紫外截止波長指當小于截止波長的輻射通過溶劑時,溶劑對此輻射產生強烈吸收,此時溶劑被看作是光學不透明的,會嚴重干擾組分的吸收檢測。
2、對于示差折光檢測器,要求選擇與組分折光率有較大差別的溶劑作流動相,以達最高靈敏度。
三、高純度:
由于高效液相色譜靈敏度高,超臨界流體色譜儀(SFC)對流動相溶劑的純度要求也高,不純的溶劑會引起基線不穩或產生偽峰,痕量雜質將使截止波長值增加50~100nm。
四、化學穩定性好:
不能選用與樣品發生反應和聚合的溶劑。
五、低粘度:
常用的低粘度溶劑有丙酮、乙醇和乙腈等。
若溶劑粘度高,會增高壓力,不利于分離。但溶劑粘度過低(如戊烷等),易在色譜柱和檢測器內形成氣泡,影響分離。
【鐵皮石斛】
鐵皮石斛為蘭科植物鐵皮石斛Dendrobiumoffi---cinaleKimuraetMigo的干燥莖,具有益胃生津,滋陰清熱之功效,因其特殊的生存環境和卓著的滋補功效名列“中華九大仙草”之首。由于石斛藥材在化學成分和結構組織上具有一定相似性,使鑒定和質量評價工作較困難。目前常用的方法之一是高效液相色譜法,《中國藥典》2015第一部規定:供試品色譜中,甘露糖與葡萄糖的峰面積比應為(2.4~8.0);所采用高效液相色譜的理論塔板數超臨界流體色譜儀(SFC)按甘露糖峰計算應不低于4000;按干燥品計算,含甘露糖(CHO)應為(13.0~38.0)%。
【樣品制備】
(校正因子計算)取鹽酸氨基葡萄糖適量,配置成1ml含12mg的溶液,作為內標溶液。另取甘露糖對照品置于容量瓶中,加入內標溶液,加水適量使溶解并稀釋至刻度,搖勻,吸取400μl,加入PMP(1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮)甲醇溶液與氫氧化鈉溶液各400μl,混勻,加熱水浴反應。再加鹽酸溶液混勻,用三氯甲烷洗滌,棄去三氯甲烷液,水層離心后,取上清液10μl,注入測定,計算校正因子。
(鐵皮石斛樣品制備)取本品粉末0.1219g,置提取器中,乙醇加熱回流提取,棄去乙醇液,藥淹揮干乙醇,濾紙筒拆開置于燒杯中,加水再加入內標溶液,攪拌下煎煮小時,室溫加水、混勻,離心,吸取上清液適量置頂空瓶中,加鹽酸溶液、封口,混勻、水解、放冷,用氫氧化鈉溶液調節pH值至中性,取上清液注入液相色譜儀,測定,即得。
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