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  • 發布時間:2020-08-03 09:57 原文鏈接: 色譜儀技術指標及流動相溶劑的要求

      高效液相色譜儀與氣相色譜儀的進樣方式、流動相、流動相與樣品的作用、流動相粘度、流動相流動壓力、固定相粒度、柱溫、樣品回收和應用范圍等技術指標的差別如下:

      一、進樣方式:

      1、高效液相色譜儀:樣品制成溶液。

      2、氣相色譜儀:樣品需加熱氣化或裂解且不分解。

      二、流動相:

      1、高效液相色譜儀:可選用不同性質的各種溶劑。

      2、氣相色譜儀:惰性氣體。

      三、流動相與樣品的作用:

      1、高效液相色譜儀:可發生作用,能改善分離選擇性。

      2、氣相色譜儀:不發生作用。

      四、流動相粘度:

      1、高效液相色譜儀:10ˉ3Pa·S

      2、氣相色譜儀:10ˉ5Pa·S

      五、流動相流動壓力:

      1、高效液相色譜儀:2~20MPa

      2、氣相色譜儀:1~0.5MPa

      六、固定相粒度:

      1、高效液相色譜儀:5~10um

      2、氣相色譜儀:0.1超臨界流體色譜儀(SFC)~0.5mm

      七、柱溫:

      1、高效液相色譜儀:常溫

      2、氣相色譜儀:常溫~300℃

      八、樣品回收:

      1、高效液相色譜儀:容易且可定量,適合大量制備。

      2、氣相色譜儀:困難。

      九、應用范圍:

      1、高效液相色譜儀:沸點高、極性強、穩定性差、分子量大的化合物和離子化合物。

      2、氣相色譜儀:穩定性好和易氣化的化合物。

      一、溶劑對于待測樣品必須具有合適的極性和良好的選擇性。

      二、溶劑要與檢測器匹配:

      1、對于紫外吸收檢測器,應選用檢測器波長比溶劑的紫外截止波長長。

      溶劑的紫外截止波長指當小于截止波長的輻射通過溶劑時,溶劑對此輻射產生強烈吸收,此時溶劑被看作是光學不透明的,會嚴重干擾組分的吸收檢測。

      2、對于示差折光檢測器,要求選擇與組分折光率有較大差別的溶劑作流動相,以達最高靈敏度。

      三、高純度:

      由于高效液相色譜靈敏度高,超臨界流體色譜儀(SFC)對流動相溶劑的純度要求也高,不純的溶劑會引起基線不穩或產生偽峰,痕量雜質將使截止波長值增加50~100nm。

      四、化學穩定性好:

      不能選用與樣品發生反應和聚合的溶劑。

      五、低粘度:

      常用的低粘度溶劑有丙酮、乙醇和乙腈等。

      若溶劑粘度高,會增高壓力,不利于分離。但溶劑粘度過低(如戊烷等),易在色譜柱和檢測器內形成氣泡,影響分離。

      【鐵皮石斛】

      鐵皮石斛為蘭科植物鐵皮石斛Dendrobiumoffi---cinaleKimuraetMigo的干燥莖,具有益胃生津,滋陰清熱之功效,因其特殊的生存環境和卓著的滋補功效名列“中華九大仙草”之首。由于石斛藥材在化學成分和結構組織上具有一定相似性,使鑒定和質量評價工作較困難。目前常用的方法之一是高效液相色譜法,《中國藥典》2015第一部規定:供試品色譜中,甘露糖與葡萄糖的峰面積比應為(2.4~8.0);所采用高效液相色譜的理論塔板數超臨界流體色譜儀(SFC)按甘露糖峰計算應不低于4000;按干燥品計算,含甘露糖(CHO)應為(13.0~38.0)%。

      【樣品制備】

      (校正因子計算)取鹽酸氨基葡萄糖適量,配置成1ml含12mg的溶液,作為內標溶液。另取甘露糖對照品置于容量瓶中,加入內標溶液,加水適量使溶解并稀釋至刻度,搖勻,吸取400μl,加入PMP(1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮)甲醇溶液與氫氧化鈉溶液各400μl,混勻,加熱水浴反應。再加鹽酸溶液混勻,用三氯甲烷洗滌,棄去三氯甲烷液,水層離心后,取上清液10μl,注入測定,計算校正因子。

      (鐵皮石斛樣品制備)取本品粉末0.1219g,置提取器中,乙醇加熱回流提取,棄去乙醇液,藥淹揮干乙醇,濾紙筒拆開置于燒杯中,加水再加入內標溶液,攪拌下煎煮小時,室溫加水、混勻,離心,吸取上清液適量置頂空瓶中,加鹽酸溶液、封口,混勻、水解、放冷,用氫氧化鈉溶液調節pH值至中性,取上清液注入液相色譜儀,測定,即得。

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