流式細胞儀(flow cytometry,FCM)是集激光設備、電子信息技術、光學精確測量技術性、電子信息技術及其體細胞瑩光技術性、單克隆抗體技術性為一體化的新式新科技儀器設備,具備敏感度高、可重復性好、非特異強、方式靈便、剖析更快等優勢。
一、流式細胞儀的基礎主要用途
流式細胞儀能夠一起檢驗單獨體細胞的多種多樣體細胞主要參數。
1.內部主要參數:前向角光光學散射(FSC)顯示信息體細胞的尺寸,側面角光光學散射(SSC)顯示信息細胞質的顆粒物性。從內部主要參數可掌握體細胞的尺寸、形狀、細胞質的顆粒物性、黑色素含水量等。
2.外界主要參數:對體細胞的某個被測成份開展非特異瑩光標識后開展檢驗,包含DNA成份及含水量、RNA含水量、體細胞表層和體細胞內的各種各樣抗原、體細胞作用特異性檢驗等,剖析范疇很廣且非特異強。流式細胞儀能以每秒十余、百余、數千個體細胞的速度開展檢驗,測量的體細胞數量達到千余、數十萬,促使樣版能在較短期內內獲得全方位和精確結果。
二、樣版的收集和單細胞懸浮液制取的質量管理
用以流式細胞剖析的樣版須是單細胞懸浮液。
1.血夜、脊髓是純天然的單細胞懸浮液,可立即染色劑剖析。標本采集用肝素抗凝,需要6鐘頭內開展抗原校準染色劑,時間太長,體細胞特異性減少,危害剖析結果,48鐘頭后的標本采集無剖析實際意義。一些實驗以某一大群體細胞為檢驗另一半,須將測定體細胞成份提取。東大整形常見淋巴細胞分離出來液分離出來淋巴細胞,做成單細胞懸浮液。
2.實體線機構標本采集單細胞懸浮液的制取:取手術治療摘除的新鮮機構的異常一部分用骨科鑷取放一塊塊機構置鋼在網上輕輕地擦磨,一起用PBS緩沖液清洗,搜集清洗下的單細胞懸浮液,調體細胞濃度值至lxl06/ml,經150目滌綸膜過濾、抽濾,取沉淀加70%酒精固定不動預留。應留意在鋼在網上擦磨的全過程中,用勁要適度,用勁過大,對體細胞損害很大,造成很多體細胞殘片,危害剖析。
三、單細胞懸浮液瑩光染色劑的質量管理
瑩光染色劑對流式細胞剖析關聯重特大,我科應用的熒光染料有:PE、FTTC、cychrome、PI等,實際操作時將標本采集和著色劑加微信好友試管嬰兒底端,攪拌,遮光(明亮可導致瑩光淬滅),室內溫度置放20分鐘,如室內溫度過低危害染劑融合,可適度增加染色劑時間。血夜、脊髓標本采集染色劑后經溶血、清洗、固定不動全過程就能上機操作。應留意標本采集和實驗試劑使用量非常少,不可加進試管嬰兒內壁,避免標本采集和實驗試劑不可以充足觸碰上色。溶血必須要充足,沒有徹底融解的血細胞及殘片的存有危害檢驗剖析。
四、上機操作檢驗剖析的質量管理
上機操作獲得前應用BD企業出示的質量控制脂質體(calibrate bends)來設定和調整儀器設備的各種各樣主要參數于最好情況,如設定光電倍增管(PMT)工作電壓,調整瑩光賠償,檢驗探測儀的敏感度,使儀器設備的變異系數(CV值)在2%之內。
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