實驗方法原理 火箭免疫電泳法是單向免疫擴散法的一種改進，通過應用直流電（穩壓穩流）使抗（APOA1和B）在含有特異性抗體的瓊脂糖凝膠中擴散，PH8.6時抗原向陽極移動，在泳動圖中與凝膠中的抗體反應，逐漸形成類似火箭的沉淀鋒，其鋒高（或鋒面積）與抗原濃度成正比，故可作抗原定量。
實驗步驟
一、 實驗器材：
l. 電壓用穩壓整流器，有流水冷卻裝置的電泳槽（國產電泳儀一般都可使
用）
2. 水平臺。
3. 10cmX7cm玻璃板及同樣大小的聚脂薄膜（選擇不被染色的投影儀用薄
膜即可）．
4. 搭橋用紗布及濾條。
5. 粗濾紙若干張。
6. 瓊脂糖膠打孔器。
二、實驗試劑：
1. 巴比妥緩沖液，離于強度0.05 PH8.6
2. 10g/l瓊脂糖（標準電內溶）用巴比妥緩沖液配制，加熱溶化，沉淀后，分裝10ml/管，冷卻后4℃貯存。
3. 0.15mmol/lNaCl溶液。
4. 免（或羊）抗人apoA抗血清（效價不低于1：16）及apob抗血清（效價
不低于1：32）。
5. 定值參考血清．
6. 染色染：考馬斯亮藍R-250，0.259g溶于甲醇45ml中，加冰醋酸10ml及45ml混合，溶后備用。
7. 脫色液：每升含冰醋酸50ml及甘油100ml。
四. 實驗操作：
l. 澆板：每板用1g/dl瓊脂糖10ml，沸水浴中融化，混勻，冷至50－55℃
時加人apoA抗血清50ul，的apoB抗血清8ul（用量視抗血清效價而定），迅速混
勻后再預置在水平臺上的玻璃板上冷卻后放在4℃，20min后打孔，孔在板的陰
極端，孔徑3mm，孔間距至少5mm，孔容量5ul，把板放在電泳槽，用濾紙搭橋。
2. 稀釋抗原：用0.15mmol/lNacl液將定值參考血清稀釋成1：100. 1：150. 1:200. 1：300及1：400（作標準曲線之用），血清標本按1：20O稀釋，放4℃冰箱不超過3天。
3. 加樣：在低電流狀態（10mA/板）將稀釋好的定值血清及樣本分別吸取5ul（準確），加人瓊脂糖凝膠加樣孔內，每板都要做一系列標準。
4. 通電：穩電穩流24mA/板，端電壓6-8V/cm，以流水冷卻使瓊脂保溫15C電泳3－4h。
5. 脫雜蛋白及了膠膜：電泳后的瓊脂糖板浸泡在0．15mmol/lNaCL中3Omin，將膠膜抗置于聚脂膜上，用多層濾紙在輕輕加壓吸干腔內水分，完后將濾紙. 膠膜與聚脂膜在者儀器自然干燥，或用熱吹風機吹干，干后膠膜會自然與濾紙及聚脂膜分開。
6. 涂色：將瓊脂糖膠膜平鋪浸泡于染色液內20-30min。
7．脫色：用脫色液浸泡以染色的膠膜至火箭樣清晰，背景基本無色，可在水
中用兩張玻璃在將膠膜夾住，晾干后可長期保存，也可以用流水浸泡脫色至背景
干凈。
三、計算：測量5種濃度的血清與每個標本的鋒高（從孔中心到鋒尖計），apoA1峰高于apoB峰，兩者分別接抗原濃度與鋒高作標準（或直線，但在軸上有截距）在曲線上查出每個標本中的apoA1與apoB濃度。
本法測定范圍是：apoA1 0.4-2.5g/l apoB 0.3-2.0g/l
注意事項
l. 抗原片稀釋倍數與抗血清用量的計算，應以火箭峰清晰標準曲線斜率適中并成直線為宜，本法同時測定apoA1與apoB，應調整兩種抗血清的量，使二者鋒高有區別apoB鋒不小于1cm。
2. 不同種類來源的血清（如兔與羊）在等效價的情況下進行試驗，結果會有差異，apoA1測定以兔抗血清為好，用兔血清時鋒逐形尖細，而羊血清所產生的峰粗l，鋒尖圓鈍，優勢在峰項出現虛影。
3. 在一定條件下電泳不同的稀釋度，參考血清的鋒高不會有明顯變動，標準曲線斜率基本一致，如標本峰高超出標本曲線范圍時，應調整標本稀釋倍數后測板間CV通常小于5%。
4. 火箭電泳結果可用染色法或直接肉眼觀察可見的火箭峰．前者用樣本mmol/少抗血清，但如適當增加標本及抗血清用量．不著色更為方便。
5“火箭峰的測量可以計算面積或峰高，面積是峰高乘以峰寬（峰半高處的寬度）測量精度最好能達0.1mm， 需用機械或電子放大設備。