實驗材料 DNA
試劑、試劑盒 SSCNaClNaOHTris·Cl
儀器、耗材 紫外透射儀電泳儀多樣抽濾加樣器
實驗步驟
1. 裁一張與多樣過濾加樣器一樣大小的尼龍膜,將膜置于6×SSC的表面讓其自然浸沒。放置10 min。
2. 裁一張與多樣過濾加樣器一樣大小的Whatman 3 MM 濾紙,用6×SSC浸濕。
3. 將Whatman 3 MM 濾紙置于多樣抽濾加樣器上,將膜放置于其上。將多樣抽濾加樣器按廠商說明書安裝好,確保裝置中不漏氣。
4. 在DNA中加入20×SSC使其終濃度為6×SSC,體積為200~400 μl,在100℃變性10 min,然后置于冰中。
5. 連接吸液裝置與多樣抽濾加樣器,每孔中加入500 μl 6×SSC。
6. 將DNA樣品離心5 s,將樣品加于各孔中,小心勿讓吸頭觸及膜,讓樣品濾過。
7. 拆開多樣過濾加樣器裝置,將膜置于一張浸過變性液的Whatman 3 MM 濾紙上,放置10 min。
8. 將膜轉至一張浸過中和液的的Whatman 3 MM 濾紙上。放置5 min。
9. 將膜置于一張Whatman 3 MM 濾紙上,晾干。
10. 將尼龍膜置于可透過紫外線的塑料夾層中,將有DNA的一面朝下置于紫外透射儀上照射適當的時間以固定DNA。
11. 將晾干的膜夾于Whatman 3 MM 濾紙之間,室溫下可保存數月。
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