實驗方法原理 與瓊脂糖凝膠不同,聚丙烯酰胺凝膠灌制時不能加入溴化乙錠,因為此染料會影響丙烯酰胺的聚合。然而,電泳后可用溴化乙錠進行聚丙烯酰胺凝膠的染色。由于聚 丙烯酰胺會猝滅溴化乙錠的熒光,所以檢測 DNA 的靈敏度降低。電泳后也可用核酸染料SYBR Gold ( Molecular Probes) 進行聚丙烯酰胺凝膠的染色。它也不能在聚合過程中摻入到凝膠中,這樣會妨礙 DNA 的遷移并使 DNA 條帶變形。亞甲藍染色檢測的靈敏度低,但較之前兩種染料價格低廉,也可選用。
試劑、試劑盒 溴化乙錠溶液 SYBR Gold 貯存液或亞甲藍貯存液
儀器、耗材 聚丙烯酰胺凝膠
實驗步驟
一、材料
1. 緩沖液和溶液
染料溶液:溴化乙錠溶液(貯存液 0.5 μg/ml ), SYBR Gold 貯存液或亞甲藍貯存液(0.001%~0.0025%, TAE 緩沖液配制)
2. 凝膠
聚丙烯酰胺凝膠
二、方法
1. 將凝膠及其附著的玻璃板輕輕地浸入需用染色液中,染色液正好將凝膠沒住即可。室溫染色 30~45 min。
2. 以玻璃板為支撐物將凝膠從染色液中取出,水沖洗后用一疊 Kimwipes 紙巾蘸去凝膠表面多余的液體。
3. 用一張 Saran Warp 膜覆蓋在凝膠上,用梳子寬的一端或折疊的 Kimwipe 紙巾除去 Saran Wrap 膜中的氣泡或皺褶。
4. 在紫外透射光源上放一張 Saran Wrap 膜,將凝膠倒置,放在透射光源上,移去玻璃板,凝膠便留在 Saran Wrap 膜上。
5. 凝膠攝影參見方案“瓊脂糖凝膠中 DNA 的檢測”。