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  • 發布時間:2020-08-10 22:52 原文鏈接: 細菌中制備基因組DNA實驗

    實驗方法原理 提取DNA的一般過程是將分散好的組織細胞在含SDS(十二烷基硫酸鈉)和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白質,再用酚和氯仿/異戊醇抽提分離蛋白質,得到的DNA溶液經乙醇沉淀使DNA從溶液中析出。

    實驗材料 細菌

    試劑、試劑盒 TE氯化銫溴化乙錠NaCl乙醇CTAB

    儀器、耗材 離心機搖床

    實驗步驟

    1.  培養5 ml 的細菌培養物至飽和狀態,取1.5 ml 的培養物離心2 min。

    2.  沉淀物加入567 μl 的TE緩沖液,用吸管反復吹打使之重懸。

    3.  加入30 μl10%的SDS和3 ℃ 20 mg/ml蛋白酶K,混勻,于37℃溫育1 h。
     
    4.  加入100 μl 5 mol/l NaCl充分混勻,再加入80 μlCTAB/NaCl溶液,混勻,于65℃溫育10 min。
     
    5.  加入等體積的氯仿/異戊醇,混勻,離心4~5 min將上清液轉人一個新管中,如果難以移出上清,先用牙簽除去界面物質。
     
    6.  加入等體積的酚/氯仿/異戊醇,混勻,離心5 min,將上清液轉入一只新管中。
     
    7.  加入0.6體積異丙醇,輕輕混合直到DNA沉淀下來,用一個封口的巴斯德管將沉淀轉移至1 ml 的70%乙醇中洗滌。
     
    8.  離心5 min,棄上清,用凍干機稍加干燥,重溶于的下100 μl TE緩沖液,每次酶切反應用10~15 μl。


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