試劑、試劑盒 溶液與緩沖液LoTEcDNA標簽連接酶
實驗步驟
實驗方案 A 和 B
1.將切下并純化的雙標簽連接為串聯體:
2.在 16t℃ 下孵育 2 h。
3.將雙標簽串聯體上取樣于 8% 的聚丙稀酰胺凝膠的一個泳道，用 100bpladder 作為分子量標準，在室溫、80℃ 電泳 3 h。
4.EB 染色。
5.將含有 400bp 或更大串聯體的凝膠區切下。
6.如同實驗方案 8 所描述的那樣，從切下的凝膠片段中純化 DNA 以分離雙標簽片段。但不要在 37°C 而是在 65℃ 下孵育，離心前不需干冰/乙醇冰浴。
7.沉淀后，用 70% 乙醇沖洗沉淀物 2 次，晾干后重新溶于 40ul 的 LoTE 中