實驗方法原理
光譜染色體核型分析（SKY)采用24種顏色對所有染色體進行涂染，在一次試驗中可以觀察到每一條染色體。該技術以光譜成像和傅里葉光譜學原理為基礎。對流式分選的染色體進行PCR標記，直接標記熒光素或間接標記半抗原。5種光譜學不同的純色染料進行組合得到獨特的染色體探針混合物。探針混合物與中期染色體雜交，用高級的圖像分析方法進行檢測。
實驗材料 組織樣本
試劑、試劑盒 37℃預熱的1X胰酶檸檬酸鹽甲醇：冰乙酸=3:1(V:V)1×PBS20×SSC
儀器、耗材 37℃溫箱或水浴鍋15mL錐形底離心管
實驗步驟
一、探針
已經標記好的商品探針以混合形式溶解在雜交液中。
二、從組織中制備染色體
1.在組織培養用的超凈工作臺中進行無菌操作，在無菌培養皿中，用刀片將組織切碎成細小的塊。
2.將細碎的組織塊轉入有足夠培養基的、具有通氣孔的組織培養瓶中；培養基要蓋過平面放置的培養瓶底（通常10?15mL)。
3.將培養瓶放入CO2培養箱中，靜置培養24h。
4.光鏡下觀察其生長狀態。
5.當達到要求的生長狀態或培養時間時，向培養瓶中加入秋水仙胺至終濃度10μg/mL，在CO2培養箱中繼續培養2?3h。
6.將培養基和懸浮的組織或細胞一起轉移到15mL錐形底離心管。對于非貼壁細胞，繼續步驟10。
7.向培養瓶中加入10mL檸檬酸鹽溶液，漂洗貼壁的細胞，棄去檸檬酸鹽溶液。
8.向培養瓶中加入10mL 1×胰酶。觀察貼壁細胞自培養瓶壁上脫離，輕輕吹打，將細胞自瓶壁上吹打下來，轉移到15mL錐形離心管中。
9.向含有貼壁細胞的15mL錐形離心管內加入5mL新鮮配置的培基
10.1500g離心10min收集細胞。
11.倒掉或吸出上清，只留下0.5?1mL溶液。用手指輕輕敲打管底，打散細胞團。
12.加人預熱的0.075mol/L KCl溶液，開始的1mL逐滴加入，滴加中間混勻;然后將剩下的14mL加入并輕輕顛倒混勻，37℃放置10min。
13.加入5滴比例為3:1的甲醇：冰乙酸，混勻。
14.1500g離心10min。
15.倒掉或吸出上清，打散細胞團。加入新鮮配置的甲醇：冰乙酸（3:1)固定液15mL，用上述的方法開始的1mL逐滴加入，滴加中間混勻；然后加入剩余的14mL固定液，并輕輕顛倒混勻。
16.1500g，離心.10min。
17.重復步驟15的固定。然而，最初的1mL不需要逐滴加人。離心，重復固定3次。
18.細胞懸液可以以固定液中細胞團的狀態-20℃保存。
19.為了進行染色體標本制備，倒掉固定液，重懸細胞團塊，加入適量的新鮮固定液使懸液輕度渾濁。
20.用200μL的槍，吸取100μL懸液，滴到干凈的載玻片上，室溫下晾干并儲存片子。滴好的片子至少自然老化2d或37℃過夜老化。
