實驗材料 抗原血清
試劑、試劑盒 碳酸鹽包被緩沖液PBSTBSA
儀器、耗材 96孔酶標板4℃冰箱恒溫培養箱分光光度計
實驗步驟
一、包被抗原
1. 用50mM 的碳酸鹽包被緩沖液（pH 9.6）溶解抗原，使抗原濃度為10-20 μg/ml，加100 μl/孔到96 孔酶標板，4℃放置過夜。
2. 第二天棄去包被液后，用PBST 洗滌3 次，每孔加入150 μl 1％ BSA 37℃封閉1 小時。
3. PBST 洗滌3 次后，每孔加入100 μl 不同倍比稀釋度的血清，并加入對照樣品，37℃孵育2 小時。
4. PBST 洗滌5 次后，加入100μl 稀釋后的HRP 標記的二抗，37℃孵育1 小時。
5. PBST 洗滌5 次后，顯色劑顯色20 min 后，酶標儀上讀取A405 吸收值。
二、包被細胞
1. 在96 孔培養板上接種細胞數為1 x 104 cells/well，37℃過夜培養。
2. 第二天用PBS 洗滌培養板2-3 次。
3. 加入125 μl/well 10% Forma lin（1:10 稀釋）, 室溫下固定15 min。
4. 用ddH2O 洗滌培養板3 次，并晾干，儲藏在2-8℃備用。
5. 用PBST 洗滌3 次，每孔加入150 μl 1％ BSA 37℃封閉1 小時。
6. PBST 洗滌3 次后，每孔加入100 μl 不同倍比稀釋度的血清，并加入對照樣品，37℃孵育2 小時。
7. PBST 洗滌5 次后，加入100 μl 稀釋后的HRP 標記的二抗,37℃孵育1 小時。
8. PBST 洗滌5 次后，顯色劑顯色20 min 后，酶標儀上讀取A405 吸收值。50mM 的碳酸鹽包被緩沖液：0.05mol/L pH9.6 碳酸緩沖液,4℃，保存,Na2CO3 0.15 克, NaHCO3 0.293 克,蒸餾水稀釋至100 ml。
ABTS 作為底物進行顯色反應(10ml)：
2 0.2M Na2HPO4 2.4ml
2 0.1M 檸檬酸2.6ml
2 ddH2O 5ml
2 ABTS 5mg
2 H2O2(30%) 4 ul（用前加入）