實驗方法原理
蛋白質在十二烷基硫酸鈉（SDS）和巰基乙醇的作用下，分子中的二硫鍵還原，氫鍵等打開，形成按1.4 g SDS/1 g蛋白質比例的SDS-蛋白質多肽復合物，該復合物帶負電，故可在聚丙烯酰胺凝膠電泳中向正極遷移，且主要由于凝膠的分子篩作用，遷移速率與蛋白質的分子量大小有關，因此可以濃縮和分離蛋白質多肽。
聚丙烯酰凝膠電泳分離蛋白質多數采用一種不連續的緩沖系統，主要分為較低濃度的成層膠和較高濃度的分離膠，配制凝膠的緩沖液，其pH值和離子強度也相應不同，故電泳時，樣品中的SDS-多肽復合物沿移動的界面移動，在分離膠表面形成了一個極薄的層面，大大濃縮了樣品的體積，即SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳的濃縮效應。
實驗材料 蛋白質樣品
試劑、試劑盒 丙烯酰胺甲叉-雙丙烯酰胺蒸餾水SDS 過硫酸胺TEMEDTris甘氨酸Tris-HClDTT溴酚蘭甘油正丁醇
儀器、耗材 移液器移液管燒杯垂直電泳槽電泳儀
實驗步驟
一、試劑
1. 30%凝膠貯備液：稱取29 g 丙烯酰胺（Acr）和1 g 甲叉-雙丙烯酰胺（Bis），加蒸餾水至100 ml，濾紙過濾貯存。
2. 10% SDS：稱取SDS 10 g 加蒸餾水至100 ml。
3. 10%過硫酸胺（AP）
4. N，N，N’，N’四甲基乙二胺（TEMED）
5. 5×電泳緩沖液：于900 ml蒸餾水中分別加入15.1 g Tris、94 g甘氨酸、5 g SDS，混勻后加蒸餾水至1 000 ml。
6. 1.5 mol/L Tris-HCl(pH8.8)和1.0 mol/L Tris-HCl(pH6.8)
7. 電泳加樣緩沖液
10 mmol/LpH6.8 Tris
200 mmol/LDTT
4%SDS
0.2% 溴酚蘭
20% 甘油
8. 正丁醇
二、器材
移液器、移液管、燒杯、垂直電泳槽、電泳儀。
三、操作步驟
1. 配制分離膠濃度8%、體積15 ml
H2O ：6.9 ml
30%凝膠貯備液 ：4.0 ml
1.5mol/L Tris-HCl(pH8.8) ：3.8 ml
10%SDS： 0.15 ml
10%過硫酸胺： 0.15 ml
TEMED： 0.01 ml
2.一旦加入TEMED，混勻后立即小心地將分離膠注入準備好的玻璃板間隙中，為成層膠留有足夠空間。用毛細管輕輕在其頂層加入幾毫升正丁醇，以阻止空氣中的氧氣對凝膠聚合的抑制作用。
3. 聚合完成之后，倒掉覆蓋液體，用去離子水洗凝膠上部數次，盡可能用吸水紙吸干頂端的殘存液體。
4. 配制5%成層膠5 ml，插入梳子，小心避免混入氣泡，垂直放置室溫下。
H2O ：3.4 ml
30%凝膠貯備液： 0.83 ml
1.0 mol/Ltris-HCl(pH6.8) ：0.63 ml
10%SDS ：0.05 ml
10%過硫酸胺： 0.05 ml
TEMED ：0.01 ml
5. 在成層膠聚合時，將樣品與加樣緩沖液混勻，100℃加熱3 min。
6. 成層膠聚合完成后，用去離子水沖洗梳孔以除去未聚合的丙烯酰胺，將凝膠放入電泳槽上。
7. 加樣。
8. 電泳：開始時電壓為8 V/cm凝膠，染料進入分離膠后，將電壓增加到15V/cm凝膠，繼續電泳直到染料抵達分離膠底部，斷開電源。
9.取下凝膠，固定、染色或進行分析。