實驗方法原理 將淀粉切割成小片段和麥芽糖。不同來源的 α-淀粉酶的最適 pH 不同。從 Bacillus subtilis 中提取的細菌酶在 pH 5.5 時有其最高活性,并且必須采用適合的緩沖溶液。
實驗材料 4-α-D-葡聚糖葡聚糖水解酶
試劑、試劑盒 磷酸鉀麥芽糖溶液淀粉溶液二硝基水楊酸試劑
儀器、耗材 分光光度計
實驗步驟
實驗所需「試劑」具體見「其他」
0.05 ml 淀粉溶液
0.05 ml 酶樣品(稀釋于 0.1 mol/L 磷酸鉀,pH7.0)。
25 ℃ 培養 5 min
0.1 ml 二硝基水楊酸試劑
在 100 ℃ 混合 10 min
1 ml H2O
測 546nm 處吸收值值。
借助校準曲線測出酶的活性。濃度范圍在 4~30 ul 的麥芽糖溶液,用水補充到 0.1 ml,而后向每個樣品中添加 0.1 ml 二硝基水楊酸試劑。100℃ 孵育 10 min 后,加入 1 ml 水,并測 546 nm 處吸收值。
計算。
1 個單位被定義為:25℃、pH 7.0 時,每分鐘從可溶淀粉中釋放 1 mol 還原基團的酶量。
注意事項
其他
試劑:
0.1 mol/L 磷酸鉀,pH 7.0
10 mmol/L 麥芽糖溶液(一水合物,Mr=360.3;36 mg 麥芽糖溶于 10 ml 水中)
淀粉溶液(0.5 g 可溶淀粉,17.5 mg NaCl,溶解于 50 ml 0.1 mol/L 磷酸鉀溶液 pH 7.0,煮沸溶解)
二硝基水楊酸試劑(3,5-二硝基水楊酸,2-羥基-3,5 二硝基苯甲酸,Mr=228.1;溶解 1 g 于 20 ml 2 mol/L NaOH 和 50 ml 水,溶解 30 g K-Na-酒石酸并用水補充至 100 ml)。