實驗方法原理 接種同源或異源細胞—比如來自小鼠胚胎的細胞。待受測細胞克隆培養之前，中等密度，用射線照射或藥物作用使其失去增殖能力。
實驗材料 第二代13天胎齡小鼠胚胎成纖維細胞絲裂霉素C
儀器、耗材 克隆培養用培養基X射線或6GCo源
實驗步驟
1. 用胰蛋白酶消化原代培養的胚胎成纖維細胞（見方案 12.6、方案 13.2），以每毫升 105 個細胞再種入培養瓶中。
2. 用以下其中之一的方法阻止進一步分裂：
(a)通過放射處理
i)原培養瓶中，細胞暴露于 60 Gy 照射細胞，用 X-光機或 γ 射線源 如 60Co（X 射線或 60Co源，能在 30 min 或更短時間內釋放 30 Gy （可以取代絲裂霉素C））。
ii)消化后細胞懸液，細胞暴露于 60 Gy 照射細胞，用 X-光機或 γ 射線源 如 60Co。然后以 1×105 ml 接種，或將照射過的細胞保存在 4°C，最長到 5 天。
(b)通過絲裂霉素 C （絲裂霉素C，100 μg/ml 儲存液，溶于 HBSS 或無血清培養基中）處理
i)以 0.25 μg/ml 將絲裂霉素加到接近匯合的細胞中，37°C 過夜（~18 h ）[ Macpherson and Bryden，1971 ]，更換培養基。
ii)胰蛋白酶消化懸液 1×107 ml 中加人絲裂霉素 C，終濃度 20 μg/ml（相當于2 μg/106 個細胞），37°C 孵育 1 h ，離心清洗（4×10 ml） 去除絲裂霉素，再以 1×105 /ml 接種 [Stanley，2002 ] 或 4°C 保存，可到 5 天。
3. 再培養 24~72 h 后，胰蛋白酶消化，再接種在新的培養基中。或直接接種保存的細胞。接種濃度 5×104 個細胞 /m l （104 個細胞 /cm2）。
4. 繼續培養 24~48 h，種入克隆培養的細胞。