實驗材料 血清
試劑、試劑盒 磷酸鹽緩沖液生理鹽水NaClNa2HPO4KH2PO4硫酸鎂溶液
儀器、耗材 水平離心機水浴箱分光光度計
實驗步驟
一、材料準備
濃度為1×10 g/ml 的綿羊紅細胞配制
（1）取經稀釋洗滌后的綿羊紅細胞配成較5%稍濃的細胞懸液。
（2）取50%細胞懸液1ml，加于14ml蒸餾水中測值為 。按下式求出于一定體積的5%細胞懸液中應加入稀釋液的毫升數。
Vi為配制的50%細胞懸液體積，Vf為于一定量5%細胞懸液中應加入稀釋的ml數：Ds為已知標準化的1×100個細胞/ml 懸液的OD540值─0.385。
2. 致敏綿羊細胞
取綿羊紅細胞懸液（1×102/ml）加等量的溶血素（2 U/ml）。充分混合。置37℃水浴中作用30分鐘，每隔10分鐘搖動一次以免細胞下降即成5×108/ml致敏羊紅細胞。
二、操作步驟
1. 補體CH50單位測定
（1） 按下表加樣：
（2）將各管充分混合。置37℃水浴中60分鐘（搖動1~2次，以免紅細胞下沉。）
（3）從水浴中取出后，立即將各管以2000轉/分離心10分鐘，將各管上清液分別移于另一試管。
（4）測定各管上清液OD值（波長=540 nm）
2. 補體CH50單位的計算
（1）從測定管（第1~5管）及溶血對照管（第6管）的OD值中減去紅細胞對照管（第7管）的OD值。再減去按待測血清每管實際用量計算出的血清色度OD值（80/800ⅹ該管實際量ⅹ第8管OD值）。即為測定管的校正OD值。然后計算各測定管的溶血率（y值）
再計算各管的y/（1-y）值。
（2）在雙對數坐標紙上，以y/（1─y）值為橫坐標，血清用量為縱坐標，得到一條直線。由于50%溶血（y=0.5）的y/（1─y）值等于1。即可由橫坐標等于1的一點，在直線上求得在縱坐標上相應的截距，此即產生50%溶血的待測血清實際用量。
（3）最后，按下列公式計算出每毫升待測血清的總補體活性，以單位/毫升表示之。
其他
50%溶血試驗定血清中補體含量用以下公式表示：
該公式可以從Von Krogh 方程式進一步加以論證：
假定X=加入的新鮮血清量
y=溶血的百分率，以小數表示
V=斜率
k=常數
轉變成對數，上述公式就變成
當以50%溶血作為終點時
代入上述公式
由于-log1＝0， ，也即表示補體的50%溶血單位就是加入的新鮮血清量。